قريبا

تكاثر شظايا الحمض النووي


مع تجزئة جزيئات الحمض النووي التي تستخدم إنزيمات التقييد والتعرف عليها عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام ، فإن الخطوة التالية هي ضرب (استنساخ) الشظية التي تم الحصول عليها وإخضاعها لتكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف.

وتسمى تقنية الضرب حبلا الحمض النووي PCR (تفاعل البلمرة المتسلسل).

في ثمانينيات القرن العشرين ، استخدمت تقنية PCR في إنتاج آلاف النسخ من قطعة واحدة من الحمض النووي. تستخدم هذه التقنية في أنابيب الاختبار التي تحتوي على الحمض النووي وبعض المركبات الأخرى الضرورية ، مثل الاشعال (التمهيدي الحمض النووي) و إنزيم بوليميريز الحمض النووي (الانزيم الذي يجعل تكرار الحمض النووي).

ال الاشعال هم فروع الحمض النووي ، مع حوالي 20 قاعدة (A ، T ، C ، G) مكملة ، أي أنها ترتبط بالتكامل مع بداية تسلسل الحمض النووي المضروب. عندما يتم مضاعفة جزيء الحمض النووي ، يجب الفصل بين الشرائط المزدوجة ، وبالتالي تشكيل خيطين مختلفين ولكن متكاملين. سيكون كل شريط بمثابة قالب للازدواجية ، لذلك نحن بحاجة إلى نوعين مختلفين من الاشعال (انظر الشكل)

تقنية PCR ، خطوة بخطوة

يتم الحصول على الحد الأدنى من عينة الحمض النووي من خلية بشرية.

  1. توضع عينة الحمض النووي ، إنزيم النسخ المتماثل (بوليميريز الحمض النووي) ، نيوكليوتيدات الحمض النووي ، والاشعال التكميلي للحمض النووي في أنبوب اختبار.
  2. يتم وضع أنبوب الاختبار في جهاز PCR (جهاز يرفع ويخفض درجة الحرارة وفقًا للبرنامج). تتم خطوات التدفئة والتبريد التالية داخل الماكينة التي يتحكم فيها البرنامج.
  3. يتم تسخين الأنبوب إلى 94 درجة مئوية لإسقاط (فصل الفصل المزدوج) الحمض النووي.

4. كل حبلا واحد من الحمض النووي المشوه يعمل كقالب لتوليف فروع جديدة مكملة. لهذا ، يتم تبريده إلى درجة حرارة 54 درجة مئوية حيث تدق البادئات إلى بداية الشريطين البسيطين ، وتكون بمثابة بادئات لإنزيم البلمرة.

5. يتم إعادة تسخين الأنبوب إلى 72 درجة مئوية (درجة حرارة تشغيل بوليميريز الحمض النووي المثالية) لتكرار الشريط. يبدأ بوليميريز الحمض النووي ، بعد نهاية التمهيدي ، في وضع النيوكليوتيدات الحرة على شرائط الحمض النووي عن طريق ربطها معًا ، وبالتالي تكوين حبلا مزدوج جديد.

فيديو: تضاعف حمض DNA (يوليو 2020).