معلومة

لماذا لا يجمع البعوض الدم بعد تنشيط الصفائح الدموية؟

لماذا لا يجمع البعوض الدم بعد تنشيط الصفائح الدموية؟



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

قد يكون هذا من القصص ...

تقع شبه القارة الهندية في الجزء الممطر من الصيف. يتبع ذلك ارتفاع عدد البعوض.

لذلك عندما قطعت كفي ، توقعت أن يتجمع البعوض هناك بقوة. ومع ذلك ، بينما استمروا في ممارسة أعمالهم على الساعدين والوجه وفي أي مكان آخر - لم يكن الدم المتدفق من راحتي يجذبهم. هذا حتى بعد أن وقفت ثابتًا لمدة دقيقة تقريبًا! ربما كانت عملية التخثر / الصفائح الدموية / إلخ طاردًا.

لماذا لا يجمع البعوض الدم بعد تنشيط الصفائح الدموية؟


الدم من جرح أو جرح ملوث بالبكتيريا من البيئة المحيطة. بالنسبة للبعوضة من منظور تطوري سيكون الأمر أشبه بتناول الطعام من على الأرض. الدم الذي يتدفق عبر عروقك نظيف (إيه) بسبب نظام المناعة لديك ، وبالتالي فإن التطور اختار مسارًا يعتمد على الإدخال في الجلد من أجل الحصول على الوجبة.


تطلق الصفائح الدموية مادة السيروتونين المسببة للأمراض وتعود إلى الدورة الدموية بعد عزل مناعي بوساطة معقدة

تتشكل المجمعات المناعية (ICs) عندما تواجه الأجسام المضادة مستضداتها. توجد الدوائر المتكاملة في الدم في حالات مرضية متعددة. نظرًا لوفرة الصفائح الدموية في الدم وأنها تعبر عن مستقبلات مرحلية ، تسمى مستقبلات Fcγ IIA (FcγRIIA) ، قمنا بفحص تأثير ICs في الدم في نموذج فأر. وجدنا أن الدوائر المتكاملة المنتشرة تسبب صدمة جهازية ، تتميز بفقدان الوعي ، عن طريق تنشيط الصفائح الدموية FcγRIIA. الصدمة كانت نتيجة لتحرير السيروتونين ، جزيء معروف أكثر لدوره في الدماغ ، من حبيبات الصفائح الدموية. أثناء الصدمة ، تم عزل الصفائح الدموية في الرئتين والدماغ وإعادتها إلى الدورة الدموية بعد تحللها. وبالتالي فإن الصفائح الدموية حاسمة في الاستجابة إلى المرحلية.


مقدمة

وصف إجماع & # x0201cInternational على (ICON) الحساسية المفرطة & # x0201d الحساسية المفرطة بأنها & # x0201ca تفاعلات خطيرة أو عامة أو نظامية أو حساسية أو فرط الحساسية يمكن أن تهدد الحياة أو قاتلة & # x0201d. 1 هذا التعريف هو عن قصد & # x0201cgeneric & # x0201d ، من حيث أنه لا يذكر أيًا من عناصر المناعة المحددة التي قد تكون متورطة في حالات معينة من الاضطراب ، حيث قد تختلف باختلاف الظروف الفردية. في هذه المراجعة ، سوف نصف العناصر المناعية الرئيسية ، مثل الأنماط المتماثلة للأجسام المضادة ، والخلايا المستجيبة ، والوسطاء البيولوجي ، والتي يمكن أن تسهم في التطور والمظاهر المرضية للتأق. سنلاحظ بشكل خاص مدى الأدلة التي تشير إلى تورط هذه المكونات المناعية في الحساسية المفرطة عند البشر مقابل تلك التي تحدث في نماذج الفئران للاضطراب ، مع التركيز بشكل خاص على أشكال الحساسية المفرطة الناتجة عن تفاعلات مسببات الحساسية مع الأجسام المضادة الخاصة بالمستضد. لن نراجع على نطاق واسع أشكال الحساسية المفرطة التي يسببها التنشيط المستقل عن الجسم المضاد للخلايا المستجيبة مثل الخلايا البدينة والخلايا القاعدية ، وهي موضوعات تمت مراجعتها في مكان آخر. 2 ، 3


الأحداث الضائرة المرتبطة بنقل الدم

تفاعلات نقل الدم الانحلالي الحادة

تحدث تفاعلات نقل الدم الانحلالي الحادة (AHTRs) في عمليات نقل كريات الدم الحمراء البالغة 1: 76000 (Eder and Chambers، 2007). تحدث AHTRs القاتلة في 1: 1 800000 عملية نقل (Vamvakas and Blajchman ، 2009). عادةً ما تكون AHTRs عبارة عن تفاعلات انحلالية تحدث خلال 24 ساعة من نقل الدم وتؤدي إلى انحلال الدم داخل الأوعية (نادرًا ما يكون خارج الأوعية الدموية) ثانويًا لعدم توافق ABO ، ولكنها قد تنتج عن عدم توافق مجموعة الدم الأخرى. في المقابل ، عادةً ما ينتج عن DHTRs انحلال الدم خارج الأوعية الدموية.

يحدث انحلال الدم داخل الأوعية الدموية عن طريق تفاعل مستضد كرات الدم الحمراء مع الأجسام المضادة مسبقة التشكيل. غالبًا ما تكون هذه الأجسام المضادة ABO (IgM) ومع ذلك ، يمكن أيضًا أن تلعب التركيزات الكافية من IgG المُشكل مسبقًا دورًا. يمكن أن تؤدي حالات عدم التوافق الأخرى في فصيلة الدم إلى AHTR ، مثل الأجسام المضادة لمضادات نظام فصيلة الدم Kidd أو Duffy. أخيرًا ، قد يتم نقل البلازما غير المتوافقة إلى المريض مما يؤدي إلى AHTR. في أغلب الأحيان ، يحدث هذا بشكل ثانوي لعملية نقل الصفيحات غير المتوافقة مع ABO. تعتمد درجة انحلال الدم على كمية وقوة (عيار) الجسم المضاد ABO.

بعد التفاعل الأولي بين المستضد والجسم المضاد ، يحدث تنشيط مكمل ، مما يؤدي إلى تكوين مجمع هجوم الغشاء وتدمير كرات الدم الحمراء في نهاية المطاف مع إطلاق مكوناته في مجرى الدم. في البداية ، يرتبط الهيموجلوبين بالهابتوجلوبين ويتم استقلابه. عندما يتم استنفاد مخزون الهابتوجلوبين ، قد ينتقل الهيموجلوبين ومكونات أخرى ، مثل سدى كرات الدم الحمراء إلى الكلية ، مما يؤدي إلى تلف الأنسجة بسبب السمية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لمكونات كرات الدم الحمراء تنشيط سلسلة التخثر وتؤدي إلى تضيق الأوعية الدموية والصدمة (Bellone and Hillyer ، 2013).

تتميز AHTRs بالحمى وآلام الظهر أو الخاصرة وألم الصدر وانخفاض ضغط الدم والصدمة و "الشعور الوشيك بالموت" لدى المريض. غالبًا ما تحدث هذه النتائج بعد وقت قصير من بدء نقل الدم. يجب إيقاف نقل الدم فورًا ، ويشمل العلاج الترطيب القوي ، فوروسيميد (للحفاظ على إخراج البول) ، بالإضافة إلى دعم ضغط الدم ، والتخثر المنتشر داخل الأوعية ، والعقابيل السريرية الأخرى (Ludens et al. ، 1968).

يجب أن تبدأ عملية عمل تفاعل نقل الدم بسرعة لتحديد سبب التفاعل. قد يكشف اختبار بنك الدم عن انحلال الدم وعدم التوافق بين المتبرع والمتلقي و DAT الإيجابي. تشمل التحاليل المعملية الأخرى التي قد تكون مفيدة اختبار مستويات البيليروبين و LDH ، وتحليل البول (لتحديد الهيموجلوبين الحر في البول).

الخطأ البشري هو السبب الأكثر شيوعًا لـ AHTRs بسبب عدم توافق ABO. يمكن أن يحدث الخطأ في العديد من الأماكن: أثناء سحب الدم الأولي ، وإصدار منتج الدم ، ونقل المنتج إلى المريض الخطأ. عند حدوث AHTR ، يكون تحليل السبب الجذري أمرًا ضروريًا (وبتفويض من اللجنة المشتركة) لبدء الإجراءات التصحيحية ومنع حدوث مثل هذه الحوادث في المستقبل (Bellone and Hillyer ، 2013). تشمل الجهود المبذولة لتقليل مكون الخطأ البشري المطابقة المحوسبة للرموز الشريطية الخاصة بشعار المريض مع الباركود الخاص بمنتجات الدم. يقضي المنع بالقضاء على احتمال حدوث خطأ بشري. في المقابل ، بسبب انخفاض مخزونات الصفائح الدموية وقصر العمر الافتراضي للصفائح الدموية ، فإن عمليات نقل الصفائح الدموية غير المتوافقة مع ABO تحدث بشكل غير شائع. يتم تخفيف AHTRs الثانوية لعمليات نقل الصفائح الدموية عن طريق نقل الصفائح الدموية ذات العيار المنخفض أو الصفائح الدموية المتوافقة مع ABO.


مناقشة

يعد وجود نشاط ADA اللعابي في الحشرات الدموية أمرًا محيرًا ، لأن الأدينوزين هو مادة موسعة للأوعية ومضادة للصفائح الدموية (Collis ، 1989 Dionisotti et al. ، 1992 Chinellato et al. ، 1994) ، والتي من المتوقع أن تزيد من توافر الدم في موقع التغذية. ومع ذلك ، قد يكون الأدينوزين متورطًا في إدراك الألم المحيطي (Burnstock and Wood ، 1996 Poon and Sawynok ، 1999 Charlab et al. ، 2000) ، على الرغم من أن دوره في الشعور بالألم متناقض: بينما يبدو أن مستقبلات الأدينوزين A2 و A3 مسببان للألم بشكل واضح ، والأدينوزين يبدو أن تحفيز مستقبلات A1 ​​مضاد للألم (Poon and Sawynok ، 1998 Poon and Sawynok ، 1999). تأثير آخر لـ ADA اللعابي قد يكون مرتبطًا بالتراكم المحلي للإينوزين في موقع التغذية. لقد ثبت أن الإينوزين مثبط قوي لإنتاج السيتوكينات الالتهابية TNF-α و I l -1 و I l -12 والبروتين الملتهب الالتهابي -1α و IFN-γ (Hasko et al. ، 2000). I l -1 ، على وجه الخصوص ، هو عامل مسبب للألم المحيطي قوي (Bianchi et al. ، 1998). ومع ذلك ، فمن المشكوك فيه ما إذا كان يمكن إنتاج هذه السيتوكينات من قبل المضيف وإطلاقها خلال الدقائق القليلة التي يستغرقها البعوض للتغذية ، على الرغم من أنها قد يكون لها تأثير على مصير الاستجابة المناعية للمضيف لمسببات الحساسية اللعابية ومسببات الأمراض التي يتم حقنها بشكل مشترك مع لعاب البعوض. في حين أن دور الأدينوزين في الشعور بالألم غير واضح ، فمن المعروف أن الأدينوزين يحفز تحلل الخلايا البدينة (Tilley et al. ، 2000) ، مما يؤدي إلى إطلاق الهيستامين. من وجهة نظر البعوضة ، فإن الحكة التي يسببها الهيستامين سيكون لها تأثير غير مرغوب فيه لتنبيه العائل إلى وجوده. على الرغم من أنه من الواضح أن الأدينوزين يمكن أن يكون مفيدًا لحشرة ملوثة بالدم ، لدرجة أن ذباب رمل الفالبوتومين ينتج كميات وفيرة من المادة في الغدد اللعابية (Ribeiro et al. ، 1999 Ribeiro and Modi ، 2001) ، وجود ADA في يشير لعاب الحشرات الدموية الأخرى إلى أنه إذا كان له أي أهمية تطورية ، فقد لا يكون الأدينوزين مادة مرغوبة في موقع التغذية.

وفقًا للدور المتناقض للأدينوزين في تغذية الدم ، تشير البيانات المقدمة في هذه الورقة إلى أن وجود ADA اللعابي في البعوض ليس نتيجة ثابتة ، على عكس التواجد في كل مكان لمضادات التخثر المتنوعة أو إنزيم أبريز (Ribeiro ، 1995). لم يتم العثور على نشاط ADA في أنوفيليس غامبيا، ولكن تم العثور على أنشطة عالية نسبيًا في كليهما Culex quinquefasciatus و الزاعجة المصرية. النشاط المحدد لـ 16munitsglandpair −1 لـ الزاعجة المصرية يمثل نشاطًا محددًا من 5 وحدات مجم 1 بروتين لعابي ، بينما تمثل قيمة 2.6 وحدة C. quinquefasciatus يمثل 2.5 وحدة ملغ -1 بروتين اللعاب. هذه الكمية أكبر من النشاط المحدد لخلايا الدم الحمراء ADA (0.2 وحدة ملغ −1 بروتين Agarwal وآخرون ، 1975) وهي مماثلة لتلك الموجودة في الأنسجة المتخصصة في الهضم ، مثل ADA الخام الذي تبيعه شركة Sigma Chemical Co. الغشاء المخاطي (1-5 وحدات ملجم بروتين 1) (كتالوج Sigma Chemical ، إصدار 2000-2001). في حالة الزاعجة المصرية، يبدو أن ADA اللعابي يُفرز أثناء وجبة الدم ، كما يتضح من الانخفاض الكبير في المستويات في الغدد اللعابية بعد وجبة الدم ، ووجوده في المحاليل التي تم فحصها بواسطة إناث البعوض الجائعة ووجوده في اللعاب الناجم عن السيروتونين. في C. quinquefasciatus، لا يمكن الكشف عن أي نشاط في اللعاب الناجم عن السيروتونين ، على الرغم من ترك مستويات منخفضة جدًا من الإنزيم (أقل من 0.03 ٪ من محتوى زوج واحد من الغدد لكل بعوضة سبر) في مغذيات تم فحصها بواسطة هذا النوع. لم يتم الكشف عن انخفاض معنوي في مستويات الانزيم في C. quinquefasciatus الغدد اللعابية بعد وجبة الدم. يشير هذا إلى أن ADA يؤدي وظيفة داخلية إلى حد كبير في الغدد اللعابية C. quinquefasciatus.

يمكننا فقط التكهن بالسيناريو التطوري الذي أدى إلى وجود أو عدم وجود ADA في لعاب المفصليات الدموية ، ولكن قد نفترض أن الأدينوزين له تأثيرات إيجابية وسلبية على تغذية الدم. يمكن أن تكون الآثار الإيجابية بسبب تأثيره على تراكم الصفائح الدموية وتوسع الأوعية. ربما لهذا السبب تتطاير الرمال فليبوتوموس باباتاسي و أرجنتيبس P. لديهم كمية وفيرة من الأدينوزين في الغدد اللعابية (Ribeiro et al.، 1999 Ribeiro and Modi، 2001). من الممكن أن يكون مضيفو الفليبوتومين أقل حساسية للتأثيرات السلبية للأدينوزين ، وأنهم يتغذون عندما يكون مضيفوهم في نوم عميق ولا يستجيبون للاضطرابات الصغيرة نسبيًا أو أن ذبابة الرمل لديها آليات أخرى لمواجهة الآثار السلبية للأدينوزين على التغذية. ومع ذلك ، كلاهما الزاعجة المصرية و C. quinquefasciatus لها جزيئاتها اللعابية الموسعة للأوعية: الببتيد سيالوكينين في الزاعجة المصرية (شامبانيا وريبيرو ، 1994) ومادة غير معروفة في C. quinquefasciatus (ريبيرو ، 2000). بالإضافة الى، الزاعجة المصرية يحتوي على كميات كبيرة من أبيراز اللعابي ، الذي يمنع تراكم الصفائح الدموية (Ribeiro et al. ، 1984b) ، بينما C. quinquefasciatus يحتوي على فسفوليباز C اللعابي الفعال الذي يدمر عامل تنشيط الصفائح الدموية (J.M.C Ribeiro و I. Francischetti ، قيد التحضير). لذلك يمكن للجزيئات الأخرى أن تحل محل الوظائف الإيجابية للأدينوزين في موقع التغذية ، ولا يتبقى لنا سوى آثاره السلبية.

إذا افترضنا أن الدور السلبي للأدينوزين مرتبط بقدرته على جذب انتباه المضيف إلى موقع التغذية ، فإن شدة هذا التأثير السلبي ستتأثر بمتغيرين: الدرجة التي يسبب بها الأدينوزين الألم أو الحكة عند موقع التغذية والاستجابة السلوكية للمضيف للألم والحكة. يمكن أن يختلف المتغير الأول من نوع إلى نوع ، على سبيل المثال كثافة الخلايا البدينة في جلد العائل المختار لتغذية البعوض ، وعدد وانجذاب مستقبلات الأدينوزين التي تسبب تحلل الخلايا أو كثافة مستقبلات الأدينوزين في الجلد. يعتمد المتغير الثاني ، على سبيل المثال ، على ما إذا كانت الفقاريات نائمة أو متيقظة وكيف تتفاعل مع نفس الحافز في هاتين الحالتين. اعتمادًا على هذه المتغيرات ، قد تكون ميزة انتقائية أكثر أو أقل لتحييد التأثير السلبي للأدينوزين على تغذية الدم ، ويمكن استخدام أكثر من استراتيجية واحدة لمواجهة آثاره. وبالتالي ، يمكن تدمير الأدينوزين عبر يقلل ADA أو آثاره باستخدام المثبطات الفسيولوجية ، على سبيل المثال الجزيئات التي تعمل بطريقة معاكسة على الخلية المستهدفة ، مثل مثبطات تحلل الخلايا البدينة أو أدوية التخدير.

من المثير ملاحظة ذلك الزاعجة المصرية هو مغذي نهاري وأن مضيفيه الرئيسيين هم من البشر. المتجانسات اللعابية من الزاعجة المصرية لديها القدرة على منع إطلاق عامل نخر الورم (TNF) بواسطة الخلايا البدينة (Bissonette et al. ، 1993) ، مما يشير إلى أن هذه الحشرة قد تكون تحت ضغط لتجنب التسبب في انحلال الخلايا البدينة للمضيف. فى المقابل، C. quinquefasciatus هي مادة مغذية ليلية على البشر وقد تتجنب الآثار السلوكية السلبية للأدينوزين عن طريق التغذية عندما تكون الحالة الفسيولوجية للمضيف أقل استجابة أو غير مستجيبة لزيادة مستويات الأدينوزين في موقع التغذية. بدلا من ذلك، C. quinquefasciatus قد تحتوي على مكونات لعابية إضافية تعمل على استعداء تأثيرات مسبب للألم و / أو تأثيرات تحلل الخلايا البدينة للأدينوزين. في هذا الصدد ، من المثير للاهتمام ملاحظة أن كلاً من حشرات الترياتومين (Ribeiro and Walker ، 1994) والقراد (Paesen et al. ، 1999) تحتوي على بروتينات لعابية تعمل على تحييد الهيستامين ، وقد تم الإبلاغ مؤخرًا عن مادة مخدرة من لعاب مادة مخدرة. علة الترياتومين (دان وآخرون ، 1999). وجود ADA في الزاعجة المصرية قد تمثل إحدى الطرق العديدة التي يمكن من خلالها مواجهة الآثار السلبية للأدينوزين. في حين أن هذه الاعتبارات قد تساعد في تفسير السبب الزاعجة المصرية يمكن أن تستفيد من إفراز ADA ، ليس لدينا أي دليل على دور ADA اللعابي في C. quinquefasciatus، على الرغم من أنه يمكننا التكهن بأنه قد يكون متورطًا في بعض الوظائف الذاتية ، مثل تنظيم إشارات المرسل عن طريق إلغاء تنشيط الأدينوزين أو إنتاج مشتق إينوزين أو مشتق أنوزين كمنتج إفرازي. تشير هذه التكهنات إلى الفرضية القائلة بأن المواد اللعابية المضادة للألم والخلايا البدينة يجب أن توجد بكثرة في الغدد اللعابية لمفصليات الأرجل الدموية.

من منظور كيميائي حيوي ، من المثير للاهتمام أن نشاط AMP اللعابي لنزع الأمين C. quinquefasciatus أكبر بثلاث مرات تقريبًا من ADA ، بينما في الزاعجة المصرية إنه عُشر نشاط ADA. إنزيمات AMP deaminase و ADA هي إنزيمات من المحتمل أن تكون قد تطورت عن طريق مضاعفات الجينات (Becerra and Lazcano ، 1998). بافتراض أن النشاطين يقيمان في إنزيم واحد في الغدد اللعابية للبعوض ، فإن استنساخ هذين الإنزيمين والتعبير عنهما ، أحدهما من كل نوع من أنواع البعوض ، قد يشير إلى بقايا الأحماض الأمينية التي تمنح خصوصية أكبر تجاه AMP أو الأدينوزين. بدلاً من ذلك ، قد يعبر كل نوع من أنواع البعوض عن الإنزيمين (ADA و AMP deaminase) في غددهما بنسب مختلفة.

قد تكون (كدنا) التي نوقشت في هذه الورقة مسؤولة أو لا تكون مسؤولة عن غالبية نشاط الإنزيم المرئي في C. quinquefasciatus الغدد اللعابية. يؤكد العمل الذي تم الإبلاغ عنه هنا أن تسلسل مكتبات (كدنا) من الغدد اللعابية للحشرات الدموية يمكن أن ينتج عنه معلومات تؤدي إلى اكتشاف العديد من الإنزيمات اللعابية التي لم يتم تحديدها مسبقًا ، مثل الأميلاز ، والهيالورونيداز ، و ADA و 5-nucleotidases (Charlab et al. ، 1999 Charlab وآخرون ، 2000). إلى جانب المقايسات البيوكيميائية والدوائية المناسبة ، يعطي هذا النهج قوة دفع لفهمنا لكيفية تطور الحشرات لتصبح واحدة من أكثر مجموعات الأنواع نجاحًا وتنوعًا في مملكة الحيوان.


STEMI: الإدارة

P2Y12 مثبطات

P2Y12 مثبطات مفيدة لمزيد من تثبيط تنشيط الصفائح الدموية وتجميعها. اختيار P2Y12 مانع المستقبلات (كلوبيدوجريل, براسوغريل، و تيكاجريلور) يعتمد على استراتيجية ضخه.

كلوبيدوجريل ( الجدول 2 ) هو ثينوبيريدين من الجيل الثاني الذي يعاكس الصفائح الدموية P2Y بشكل لا رجعة فيه12 مستقبل ADP. إضافة الكلوبيدوجريل إلى الأسبرين يقلل من مخاطر الوفاة والأحداث القلبية الوعائية الأخرى لدى من سيُعالج بانحلال الفبرين (Steg et al.، 2012 Chen et al.، 2005a Sabatine et al.، 2005). ومع ذلك ، في وضع PCI الأولي ، تفضل الإرشادات الحالية ticagrelor أو prasugrel ، لأنه ثبت أنها متفوقة على clopidogrel في تجارب النتائج الكبيرة في خطر الموت وأحداث القلب والأوعية الدموية الرئيسية الأخرى في متابعة لمدة عام واحد (Wiviott et al.، 2007 Wallentin et al.، 2009 O'Gara et al.، 2013 Steg et al.، 2012).

براسوغريل ( الجدول 2 ) هو الجيل الثالث من thienopyridine P2Y12 المثبط ، الذي يتم استقلابه إلى شكله النشط بسرعة أكبر وبشكل كامل من عقار كلوبيدوجريل ، وبالتالي يكون له تأثير أكثر قوة وثباتًا (Gurbel et al. ، 2012). قارنت تجربة TRITON استخدام prasugrel مقابل clopidogrel في المرضى الذين يعانون من متلازمات الشريان التاجي الحادة الذين يتلقون الأسبرين. أظهرت الدراسة أن استخدام براسوغريل كان مرتبطًا بتقليل مخاطر الموت القلبي الوعائي ، واحتشاء عضلة القلب غير المميت ، والسكتة الدماغية غير المميتة ، ولكن مع زيادة خطر حدوث نزيف كبير (ويفيوت وآخرون ، 2007). لذلك ، لا يستعمل براسوغريل في المرضى الذين يعانون من سكتة دماغية سابقة / نوبة إقفارية عابرة أو نزيف مرضي نشط. يعتبر انخفاض وزن الجسم (أقل من 60 كجم) والعمر أقل من 75 عامًا من الموانع النسبية (Steg et al. ، 2012).

تيكاجريلور ( الجدول 2 ) هو P2Y جديد12 مانع المستقبلات. على عكس كلوبيدوقرل أو براسوغريل ، فإن تيكاجريلور ليس ثينوبيريدين. إنه عامل مباشر له تأثير قابل للعكس ، ولا يتطلب تحولًا أحيائيًا ويرتبط بشكل عكسي بـ P2Y12 مستقبلات ، معادية إشارات ADP وتنشيط الصفائح الدموية. قارنت تجربة PLATO بين ticagrelor و clopidogrel في المرضى الذين يعانون من متلازمات الشريان التاجي الحادة الذين عولجوا بالأسبرين والعلاج القياسي الآخر. أظهرت النتائج أن عقار تيكاجريلور يقلل من الوفاة القلبية الوعائية ، واحتشاء عضلة القلب ، أو السكتة الدماغية في عمر 12 شهرًا ، دون زيادة في معدل النزيف الكبير الكلي ، ولكن مع زيادة في معدل النزيف غير المرتبط بالإجراء (Wallentin et al. ، 2009).


الاستنتاجات

على الرغم من أنه لا يزال يتعين توضيح المزيد من الفحص فيما يتعلق بالعدوى المسببة للأمراض في البعوض الذي لا يطير ، إلا أن طريقة تربية البعوض الزاعجة الأنواع المعروضة هنا كانت آمنة للغاية ، وكان البروتوكول غير مكلف وأقل كثافة في العمالة ، مما يجعل من الممكن إجراء دراسات مكثفة باستخدام البعوض الذي يحمل مسببات الأمراض البشرية الخطرة ، حتى في المقاطعات التي تكون فيها أنظمة الاحتواء عالية الأمان إلزامية. يمكن أيضًا تطبيق هذا البروتوكول على أنوفيليس و كوليكس البعوض ، وهو ناقل رئيسي للأمراض المدمرة الأخرى ، مثل الملاريا وحمى غرب النيل والتهاب الدماغ الياباني.


البلازما الغنية بالصفائح الدموية: يؤثر اختيار طريقة التنشيط على إطلاق الجزيئات النشطة بيولوجيًا

البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) هي إجراء منخفض التكلفة لتقديم تركيزات عالية من عوامل النمو الذاتية (GFs). يعد تنشيط الصفائح الدموية خطوة حاسمة قد تؤثر على توفر الجزيئات النشطة بيولوجيًا وبالتالي على شفاء الأنسجة. تم تفعيل البلازما الغنية بالبلازما الغنية بالصفائح الدموية من عشرة ذكور أصحاء طوعيين بإضافة 10٪ من كلوريد الكالسيوم2، 10٪ من الثرومبين الذاتي ، 10٪ من خليط CaCl2 + الثرومبين و 10٪ من الكولاجين من النوع الأول. حضنت مشتقات الدم لمدة 15 و 30 دقيقة و 1 و 2 و 24 ساعة وتم تقييم العينات لإطلاق VEGF و TGF-β1 ، بدجف-أب ، إيل -1βو TNF-α. تنشيط PRP مع CaCl2، الثرومبين ، و CaCl2/ تشكل الجلطات الثرومبين التي تم اكتشافها من التقييم لمدة 15 دقيقة ، بينما في العينات التي يتم تنشيطها من النوع الأول من الكولاجين ، لم يتم ملاحظة تكوين الجلطة. أنتج نوع الكولاجين الأول إصدارًا عامًا أقل من GF. الثرومبين ، كاكل2/ الثرومبين ، والكولاجين من النوع الأول المنشط أظهر PRPs إطلاقًا فوريًا لـ PDGF و TGF-

ظلت مستقرة بمرور الوقت ، بينما أظهر VEGF اتجاهًا متزايدًا من 15 دقيقة إلى 24 ساعة. كاكل2 تسبب في إطلاق تدريجي لـ GFs من 15 دقيقة وزيادة تصل إلى 24 ساعة. تؤثر الطريقة المختارة لتنشيط البلازما الغنية بالصفائح الدموية على كل من الشكل المادي والإفراج من حيث كمية GF والإفراج عن الحركة.

1 المقدمة

غالبًا ما يكون إصلاح الأنسجة في إصابات الجهاز العضلي الهيكلي بطيئًا وأحيانًا غير مكتمل ، حيث يعاني المريض من الألم ومحدودية الوظيفة ، وبالتالي يكون مصحوبًا بتكاليف باهظة على المجتمع ، سواء من حيث الأموال التي يتم إنفاقها على الرعاية الصحية وأيضًا فقدان العمل. وبالتالي ، تم بذل العديد من الجهود من أجل التحقيق في أساليب جديدة لزيادة إمكانات التجدد وتفضيل التئام الأنسجة. نظرًا لأن العديد من الدراسات قد أكدت على دور عوامل النمو (GFs) في تنظيم بنية الأنسجة الطبيعية ورد الفعل على تلف الأنسجة ، يُعتقد أن استخدامها مفيد في الممارسة السريرية لتعزيز الشفاء السريع باستخدام أنسجة عالية الجودة والسماح بالتعافي المبكر والأنسجة. العودة الآمنة إلى النشاط غير المقيد [1].

تشكل الصفائح الدموية خزانًا من GFs والسيتوكينات الحرجة التي قد تحكم وتنظم عملية التئام الأنسجة. الجزيئات النشطة بيولوجيًا التي تفرزها الصفائح الدموية α- تشارك الحبيبات في العديد من الأنشطة الخلوية مثل الاتجار بالخلايا الجذعية ، والتكاثر ، والتمايز ، مع تأثير معقد على العمليات المؤيدة / المضادة للالتهابات والابتنائية / التقويضية [2]. علاوة على ذلك ، فيما يتعلق بـ GFs الفردي المنقى ، تتمتع الصفائح الدموية بميزة نظرية لاحتوائها على جزيئات نشطة بيولوجيًا مختلفة مع توازن طبيعي للوظائف الابتنائية والتقويضية ، وربما تحسين بيئة الأنسجة وتفضيل عملية الشفاء [2]. بناءً على هذا الأساس المنطقي ، تعد البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) إجراءً سهلاً ومنخفض التكلفة وقليل التوغل لإيصال تركيزات عالية من GFs الذاتية والسيتوكينات إلى الأنسجة المصابة بنسب فسيولوجية. يتم وضع هذا المنتج المشتق من الدم مباشرة في الأنسجة التالفة ، إما جراحيًا أو عن طريق الحقن ، وقد تم تجربته على نطاق واسع في مجالات مختلفة من الطب [3-10].

ومع ذلك ، على الرغم من الفوائد العديدة المنسوبة إلى PRP والنتائج الواعدة المبلغ عنها لإمكاناتها العلاجية ، فإن النتائج السريرية غير متجانسة ومتناقضة في بعض الأحيان. ترجع هذه النتائج المثيرة للجدل إلى كل من البروتوكولات السريرية المختلفة المطبقة ، مما يجعل من الصعب مقارنة النتائج واستخلاص النتائج حول فعاليتها الحقيقية ، والأكثر من ذلك عدم وجود توحيد قياسي في إجراءات إعداد PRP. وقد أدى ذلك إلى توفر عدد كبير من المنتجات المختلفة من حيث أنواع الخلايا وكميتها وبالتالي محتوى GF والسيتوكين وأوقات الإطلاق. من بين المتغيرات العديدة التي تؤثر على إطلاق PRP ، يعد تنشيط الصفائح الدموية خطوة حاسمة قد تؤثر على توفر الجزيئات النشطة بيولوجيًا وبالتالي على شفاء الأنسجة [10 ، 11].

يشير مصطلح "التنشيط" إلى عمليتين رئيسيتين تم بدئهما أثناء تحضير PRP: (1) إزالة حبيبات الصفائح الدموية لتحرير GFs من α- الحبيبات و (2) انشقاق الفيبرينوجين لبدء تكوين المصفوفة ، وهي عملية تخثر تسمح بتكوين جل الصفائح الدموية ، وبالتالي حصر إفراز الجزيئات في الموقع المختار [12]. يتم تضمين خطوة التنشيط قبل إدارة PRP في العديد من البروتوكولات المستخدمة ، عادةً عن طريق إضافة الثرومبين و / أو كلوريد الكالسيوم (CaCl)2) ، لكن بعض الأطباء يفضلون حقن البلازما الغنية بالصفيحات في شكلها المريح ، معتمدين على تنشيط الصفائح الدموية التلقائي الذي يحدث بعد التعرض للكولاجين الأصلي الموجود في الأنسجة الضامة [13]. حاليًا ، هناك نقص في الأدلة على الطريقة الأنسب لتنشيط PRP ، ويعتمد اختيار استراتيجية تنشيطها بشكل أساسي على أسباب عملية بدلاً من دعمها بدراسات حول تأثيرات الإجراءات المختلفة على تحرير الصفائح الدموية النهائية. قد يسمح تعريف الاختلافات بين طرق التنشيط بتحسين تحضيرات PRP ، من خلال تحديد الإستراتيجية الأنسب لكل مرض محدد ، من أجل الحصول على PRP مخصص لمختلف المؤشرات السريرية.

الهدف من هذه الدراسة هو مقارنة الاستراتيجيات المختلفة لتنشيط PRP ، من خلال تقييم محتوى كل من GFs والسيتوكينات ، بالإضافة إلى حركية إطلاقها.

2. المواد والأساليب

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات المحلية ومجلس المراجعة المؤسسية ، ووقع كل مانح على موافقة خطية مستنيرة. تم الحصول على البلازما الغنية بالصفائح الدموية والبلازما الفقيرة بالصفائح الدموية والثرومبين الذاتي من عشرة رجال أصحاء طوعيين (متوسط ​​العمر ± SD:

سنوات) الذين خضعوا لسحب عينة دم مقدارها 150 مل. لم تظهر الموضوعات مع الاضطرابات الجهازية ، أو عادة التدخين ، أو العدوى ، أو تعاطي العقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات في الأيام الخمسة التي سبقت التبرع بالدم ، أو الهيموغلوبين أقل من 11 جم / ديسيلتر ، أو الصفائح الدموية أقل من 150 × 10 3 /ميكرومترL. تم تعيين رقم رمز لكل عينة لضمان عدم الكشف عن هويته.

2.1. تحضير وتفعيل مشتقات الدم

تم تحضير PRP و PPP وثرومبين ذاتي بواسطة فاصل دم كامل (Angel ، Cytomedix Inc. ، Gaithersburg ، MD). لتحضير PRP ، تم سحب 150 مل من الدم الوريدي من كل متبرع ونقله إلى غرفة الطرد المركزي Angel وطرده لمدة 25 دقيقة بسرعتين مختلفتين: عند 3500 دورة في الدقيقة لأول 3 دقائق وعند 3000 دورة في الدقيقة للوقت المتبقي. بعد ذلك ، تم استخلاص البلازما الغنية بالصفائح الدموية من الغلاف الجامد في محقنة فارغة معقمة. تم جمع PPP من كيس آخر ونقله إلى محقنة جديدة. تم تحضير الثرومبين الذاتي بدءًا من PPP وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة.

2.2. تركيز الصفائح الدموية وعدد خلايا الدم البيضاء

تم تحليل تركيز الصفائح الدموية وعدد خلايا الدم البيضاء (WBC) لـ PRP و PPP والدم المحيطي (PB) باستخدام عداد آلي لخلايا الدم (محلل الدم COULTER LH 750 Beckman Coulter SRL ، ميلان ، إيطاليا). كان الخطي 5-1000 × 10 3 /ميكرومترL لتعداد الصفائح الدموية و 0.1 - 100 × 10 3 /ميكرومترL لتعداد خلايا الدم البيضاء.

2.3 تفعيل PRP

تم تفعيل PRP بإضافة 10٪ CaCl2 (التركيز النهائي 22.8 مم) ، 10٪ من الثرومبين الذاتي ، 10٪ من خليط CaCl2 + الثرومبين و 10٪ من الكولاجين من النوع الأول (التركيز النهائي 4 ميكرومترز) (Mascia Brunelli SpA ، ميلان). تم استخدام PRP بدون تنشيط و PPP كعنصر تحكم. تم تحضين مشتقات الدم لمدة 15 و 30 دقيقة و 1 و 2 و 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، تم طرد العينات عند 2800 × جم لمدة 15 دقيقة عند 20 درجة مئوية ، وتم جمع المواد الطافية وتخزينها عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.

2.4 تقييم عامل النمو

تم تقييم PRP و PPP لإصدار VEGF و TGF-β1 ، بدجف-أب ، إيل -1βو TNF-α (R & ampD Systems ، مينيابوليس ، مينيسوتا). تم إذابة العينات عند 4 درجات مئوية وطردها قبل التحليل ثم تم معايرتها في نسختين وتم تقييم العوامل باستخدام المقايسات المناعية الكمية لإنزيم الساندويتش باتباع تعليمات الشركة المصنعة. تم التعبير عن النتائج كـ pg / mL.

2.5 تحليل احصائي

تم التعبير عن جميع البيانات الموزعة بشكل طبيعي بشكل مستمر من حيث المتوسط ​​والانحراف المعياري للمتوسط ​​الذي تم استخدامه للوسيط غير الموزع بشكل طبيعي. تم إجراء اختبار Kolmogorov Smirnov لاختبار الحالة الطبيعية للمتغيرات المستمرة. تم حساب المنطقة الواقعة تحت منحنى الإطلاق في كل وقت قياس لكل طريقة تنشيط لتحديد كمية وحركية الجزيئات المحررة. تم إجراء النموذج الخطي العام للقياسات المتكررة (GLM) مع اختبار Sidak لمقارنات متعددة لتقييم الاختلافات في أوقات المتابعة المختلفة في كل طريقة تنشيط. تم استخدام المقاييس المتكررة GLM أيضًا لتقييم تأثير طرق التنشيط المختلفة.

اعتبرت كبيرة.

تم إجراء جميع التحليلات الإحصائية باستخدام SPSS v. 19.0 (IBM Corp. ، Armonk ، NY ، الولايات المتحدة الأمريكية).

3. النتائج

3.1. تركيز الصفائح الدموية وعدد خلايا الدم البيضاء

كان متوسط ​​عدد الصفائح الدموية لكل مليمتر مكعب

لـ PB و PP و PRP على التوالي. كان متوسط ​​تركيز خلايا الدم البيضاء لكل مليمتر مكعب

و و PB و PP و PRP على التوالي.

3.2 تشكيل جلطة

كاكل2، الثرومبين ، CaCL2/ الثرومبين ، والكولاجين من النوع الأول تسبب في تراكم مختلف للصفائح الدموية. على وجه الخصوص ، يتم تنشيط PRP باستخدام CaCl2، الثرومبين ، و CaCL2/ الجلطات المكونة للثرومبين التي تم اكتشافها في التقييم لمدة 15 دقيقة وتستمر حتى 24 ساعة (الثرومبين و CaCL2/ الثرومبين مستقر بالفعل ظاهريًا في 15 دقيقة ، CaCl2 بدءًا من 15 واستقر بصريًا في 30 دقيقة) ، بينما في عينات الكولاجين من النوع الأول ، لم يلاحظ أي تكوين جلطة لأي من النقاط الزمنية التي تم تقييمها (الشكل 1).

3.3 عامل النمو وإطلاق السيتوكين

لا توجد مستويات يمكن اكتشافها من IL-1β و TNF-α تم العثور على إفراز في أي من العينات في أي من الأوقات التجريبية التي تم تقييمها.

تم الكشف عن كميات أقل بشكل ملحوظ من GFs في PRP و PPP غير المنشط مقارنة بـ PRP المنشط بشكل مختلف ().

تظهر تأثيرات طرق التنشيط المختلفة على إصدار PRP GF في الشكل 2 بالتفصيل.

3.3.1. PDGF

في 15 و 30 دقيقة ، يتم استخدام الثرومبين و CaCl2/ الثرومبين أنتجت كمية أعلى بكثير من PDGF فيما يتعلق بكمية CaCl2 (). بعد 1 ساعة ، CaCl2 والثرومبين وحده أنتج كمية مماثلة من PDGF ، في حين أن مزيج CaCl2/ تسبب الثرومبين في إطلاق PDGF أعلى بكثير فيما يتعلق بإفراز CaCl2 (). علاوة على ذلك ، الثرومبين و CaCl2/ أظهر الثرومبين كمية أكبر من PDGF فيما يتعلق بنوع الكولاجين الأول (). في 2 ساعة CaCl2، الثرومبين ، و CaCl2/ ينتج الثرومبين مستويات مماثلة من PDGF ، وكلها أعلى بكثير مقارنة بمستويات الكولاجين من النوع الأول. بعد 24 ساعة ، يتم إطلاق PDGF من CaCl2 كان PRP المنشط أعلى بكثير فيما يتعلق بالثرومبين () و CaCl2 و CaCl2/ تسبب الثرومبين في زيادة PDGF مقارنةً بنوع الكولاجين الأول () (الشكل 2).

3.3.2. TGF-β

في 15 دقيقة ، الثرومبين و CaCl2/ أظهر الثرومبين كمية أكبر من TGF-β فيما يتعلق بذلك من CaCl2 ونوع الكولاجين الأول () ، بينما لم يلاحظ أي فرق كبير بين CaCl2 والكولاجين من النوع الأول. بعد 30 دقيقة ، يتم استخدام الثرومبين و CaCl2أنتج / الثرومبين كمية أعلى بكثير من TGF-β فيما يتعلق بنوع الكولاجين الأول (). في ساعة واحدة ، تسبب الثرومبين في ارتفاع ملحوظ في عامل النمو TGF-β الافراج فيما يتعلق بتلك من CaCl2 () ، بينما CaCl2، الثرومبين ، و CaCl2/ كانت الثرومبين أعلى مقارنة بنوع الكولاجين الأول (). مستويات أعلى بشكل ملحوظ من TGF-β لوحظ ل CaCl2، الثرومبين ، و CaCl2/ الثرومبين فيما يتعلق بنوع الكولاجين الأول في كل من ساعتين و 24 ساعة () (الشكل 2).

3.3.3. VEGF

في 15 و 30 دقيقة ، يتم استخدام الثرومبين و CaCl2/ الثرومبين أنتجت كمية أعلى بكثير من VEGF مقارنة مع CaCl2 ونوع الكولاجين الأول (). بعد ساعة واحدة ، كاكل2 والثرومبين وحدهما أنتجا كمية مماثلة من VEGF ، في حين أن توليفة CaCl2/ تسبب الثرومبين في إطلاق VEGF أعلى بكثير فيما يتعلق بإفراز CaCl2 (). علاوة على ذلك ، CaCl2، الثرومبين ، و CaCl2/ أظهر الثرومبين كمية أكبر من VEGF فيما يتعلق بنوع الكولاجين الأول (). في كل من 2 ساعة و 24 ساعة CaCl2، الثرومبين ، و CaCl2/ الثرومبين أنتجت مستويات VEGF أعلى بكثير مقارنة بمستويات الكولاجين من النوع الأول (). أخيرًا ، CaCl2/thrombin produced a significantly higher amount of VEGF with respect to that of thrombin at 24 hours ( ) (Figure 2).

3.4. Growth Factor Release Kinetics

The release pattern of PRP activated with CaCl2 was similar for all the GFs evaluated, with a significant and progressive release of GFs starting from 15 minutes and increasing up to 24 hours ( ) (Figure 2). Thrombin, CaCL2/thrombin, and collagen-type-I-activated PRP showed an immediate release of PDGF and TGF- that remained stable over time (Figure 2) conversely, VEGF showed an increasing trend from 15 minutes up to 24 hours ( ).

4. مناقشة

The main finding of our study is that the activation modality influences PRP clot formation, leading to differences in terms of both amount and release kinetics of platelet-derived GFs.

The most commonly used activation methods in the current clinical practice [14–16] were directly compared: CaCl2, autologous thrombin, their combination, and collagen type I to mimic the clinical conditions where their presence in the treated connective tissues should induce an “فى الموقع” platelet activation. The latter is currently chosen for several PRP applications, since it is considered to be an easier and more effective strategy to deliver platelet bioactive molecules. However, our data showed that collagen type I does not lead to the same PRP releasate with respect to the other activators in terms of GFs released. In this study, we evaluated 3 GFs chosen among the most representative of PRP and involved in the wound healing cascade (TGF-β1, PDGF-AB, and VEGF) and 2 inflammatory mediators (IL-1β and TNF-α) to test whether the selected activators might induce an inflammatory component of PRP releasate. ال في المختبر results showed significantly lower quantities of TGF-β1, PDGF-AB, and VEGF when collagen type I was used in this experimental condition.

Collagen is a weak platelet activator, which results in a lower amount of GFs released with respect to the other activation methods. This is a key aspect to bear in mind, since GFs are potent molecules and even small variations might affect the results in the tissue healing process [17, 18]. In fact, although low concentrations may be not effective enough to elicit the desired effects, high GF concentrations may have inhibitory effects on cellular functions and the level of the healing response [19–21]. Besides, they can be associated with unresolved inflammation and fibrotic events [22], thus confirming the importance of obtaining a proper releasate, also by choosing a specific PRP activation method to stimulate the release of bioactive molecules according to the requirements of the targeted tissue.

Besides the overall higher amount of released GFs with the other activation strategies used in the clinical practice, the comparison of the amount of molecules detected at each time point underlined another key factor related to PRP activation: the different release kinetics. This is of major importance and may also affect the treatment outcome. In fact, a rapid activation has been associated with a decrease in the total amount of GFs available at the tissue site over time [23]. GFs have a short half-life (from minutes to hours) and, if they are not immediately used upon release from platelets, they might be degraded before additional tissue receptors become available [15, 24]. From a clinical point of view, this aspect may be one of the causes related to the poor results sometimes reported by using PRP in musculoskeletal tissue regeneration [23]. Conversely, some other applications may benefit from a less sustained release, with the final results determined by the burst of bioactive molecules released [25, 26].

The study results highlighted that thrombin alone and in combination with CaCl2 and collagen type I (even if at lower level in this case) presented similar kinetics, stimulating a rapid release of GFs that remains stable up to 24 h. Similarly, comparing the PRP releasate induced by thrombin or collagen type I, Fufa et al. [14] observed that both activation methods stimulate immediate initial release sustained over 10 days from a PRP clot.

Conversely, CaCl2 showed a gradual release over time, with a lower initial level followed by a progressively increasing amount of GFs released, reaching similar or even higher levels at the 24-hour evaluation.

Another important aspect for the clinical application of blood derivatives is their physical form, which may range from liquid to solid gel allowing both surgical augmentations as well as minimally invasive injective PRP delivery. Concerning this, the study underlined how different activators influence platelet aggregation. In particular, the use of CaCl2 induced clot formation within 30 minutes of its addition, whereas thrombin and CaCl2/thrombin caused a more rapid clot formation, which was already detectable at the 15-minute evaluation. Interestingly, collagen-type-I-activated platelet concentrates exhibited far less aggregation, with no visible clots up to 24 hours. This result is partially in contrast to that obtained by Fufa et al. [14], who observed that PRP activation with collagen led to clot formation, albeit far less retracted than that observed with thrombin activation. This discrepancy may be due to the different experimental conditions, such as the type of collagen and the different procedures used to prepare PRP. PRP may present a wide range in terms of type and quantity of cells and molecules such as fibrinogen, which may explain the different propensity to form clots. The state of the platelet concentrate may be as important as the released molecules for treatment success. In fact, although the lack of a clot might not be a problem in the treatment of osteoarthritis, where a liquid PRP allows all articular tissues to be targeted without the risk of dispersion from the closed joint cavity [5], the liquid form may be unsuitable for other applications. This appears to be clear for surgical augmentations, where PRP is used to entrap cells or even sutured to the lesion site [23], but may also apply for less invasive injective approaches. This may be the case of intratendinous injections. Once delivered inside the tendon in the liquid form, the timely gelification process may allow the concentrate to remain in the injected area, thus allowing GF secretion in the treatment site. Conversely, the persistent liquid state may increase the risk of leakage and PRP dispersion, favoured by the contraction of the musculotendinous unit that might squeeze liquid PRP away from the injection site, thus reducing or even impairing its potentially positive effects [13]. A direct PRP activation فى الموقع is an interesting approach that might overcome some of the shortcomings related to the use of thrombin, resulting in the risk of potentially life-threatening coagulopathies [27, 28], and CaCl2, sometimes associated with burning sensation due to low pH, as reported by DeLong et al. [23]. However, the results obtained in this study with collagen-mediated activation cast doubts on this method for PRP application in the clinical practice. Further studies should focus not only on the distribution of the injected PRP in the treated area, but also on its persistence over time and on the consequent effects on the final outcome for each specific application [29].

Finally, besides the differences in clot formation and GFs amount and release kinetics, another interesting finding that emerged from the study analysis regards the lack of influence of the activation methods on the inflammatory molecules in the releasate. The PRP used in this experimental setting is a leukocyte-rich PRP, which is currently being debated for the potentially deleterious effects of proteases and reactive oxygen species released by the white blood cell component. In fact, whereas some authors consider leukocytes to be a beneficial source of cytokines and enzymes that may be important for the prevention of infection, others attribute better results to formulations with leukocyte depletion [30–32].

The study results showed that, even in this leukocyte-rich PRP, none of the selected activators was able to induce an inflammatory releasate, as demonstrated by the lack of IL-1β and TNF-α secretion at all the experimental times evaluated. Future studies should investigate if the same findings will be confirmed also in an inflammatory environment better reproducing PRP use in the damaged tissues of the clinical setting.

This study has some limitations that need to be discussed. In fact, today little is known about the concentration of calcium, thrombin, or collagen needed to trigger the optimal release of GFs, and different concentrations may lead to different results. For example, it has been reported that high concentrations of calcium and thrombin trigger an immediate and significant increase in TGF-β1 and PDGF concentrations, which remained generally constant over a 6-day period, whereas lower concentrations tend to reduce and delay GF release [26]. However, the selected concentrations derive from the clinical practice thus, the study findings still reflect the current PRP applications. Nonetheless, the activator concentration should be the focus of further specifically designed studies, being a key aspect to determine the final properties of the platelet concentrates. Moreover, these findings give only general indications that could be useful for future PRP application in musculoskeletal tissues, and further studies are needed to investigate the effects of different PRP activation methods on cell cultures.

The results of this study confirm the importance of the method chosen to activate PRP, by determining both its physical form and the amount and release kinetics of GFs. It is not only the presence of GFs that dictates the level of healing response, but also the ability of targeting the treatment area, thus modulating cells with an appropriate dosage and in a timely manner [33]. Thus, PRP activation strategies should be selected not only based on procedure type (open versus arthroscopic), but also according to the desired biological effects in the targeted tissue. Future studies should aim at further investigating the effect of the different activation strategy on platelet concentrates according to the lesion target, in order to optimize the في الجسم الحي effect of the released bioactive molecules and therefore increase PRP healing potential.

تضارب المصالح

Giuseppe Filardo is consultant and receives institutional support from Finceramica Faenza SpA (Italy), Fidia Farmaceutici SpA (Italy), and CartiHeal (2009) Ltd. (Israel). He is a consultant for EON Medica SRL (Italy). He receives institutional support from IGEA Clinical Biophysics (Italy), BIOMET (USA), and Kensey Nash (USA). Elizaveta Kon is a consultant for CartiHeal (2009) Ltd. (Israel) and has stocks of CartiHeal (2009) Ltd. (Israel). She is a consultant and receives institutional support from Finceramica Faenza SpA (Italy). She receives institutional support from Fidia Farmaceutici SpA (Italy), IGEA Clinical Biophysics (Italy), BIOMET (USA), and Kensey Nash (USA). Maurilio Marcacci receives royalties and research institutional support from Fin-Ceramica Faenza SpA (Italy). He receives institutional support from Fidia Farmaceutici SpA (Italy), CartiHeal (2009) Ltd. (Israel), IGEA Clinical Biophysics (Italy), BIOMET (USA), and Kensey Nash (USA). All the other authors declare that there are no competing interests regarding the publication of this paper.

شكر وتقدير

The authors thank Dr. Elettra Pignotti for statistical assistance and Mr. Keith Smith for English editing, Rizzoli Orthopaedic Institute, Bologna, Italy. This work was supported by grants from “

” funds, Italian Ministry of Health (Project RF-2009, Grant no. 1498841), and Emilia-Romagna Region (Region-University Program 2010–2012: Regenerative Medicine of Cartilage and Bone).

مراجع

  1. E. Kon, G. Filardo, A. Di Martino, and M. Marcacci, “Platelet-rich plasma (PRP) to treat sports injuries: evidence to support its use,” Knee Surgery, Sports Traumatology, Arthroscopy، المجلد. 19 ، لا. 4, pp. 516–527, 2011. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  2. M. Tschon, M. Fini, R. Giardino et al., “Lights and shadows concerning platelet products for musculoskeletal regeneration,” Frontiers in Bioscience-Elite، المجلد. 3 ، لا. 1, pp. 96–107, 2011. View at: Google Scholar
  3. L. Andriolo, B. Di Matteo, E. Kon, G. Filardo, G. Venieri, and M. Marcacci, “PRP augmentation for ACL reconstruction,” BioMed Research International، المجلد. 2015, Article ID 371746, 15 pages, 2015. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  4. M. Del Fabbro, G. Gallesio, and M. Mozzati, “Autologous platelet concentrates for bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaw treatment and prevention. A systematic review of the literature,” المجلة الأوروبية للسرطان، المجلد. 51 ، لا. 1, pp. 62–74, 2015. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  5. G. Filardo, E. Kon, A. Roffi, B. Di Matteo, M. L. Merli, and M. Marcacci, “Platelet-rich plasma: why intra-articular? A systematic review of preclinical studies and clinical evidence on PRP for joint degeneration,” Knee Surgery, Sports Traumatology, Arthroscopy، المجلد. 23 ، لا. 9, pp. 2459–2474, 2015. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  6. E. Lopez-Vidriero, K. A. Goulding, D. A. Simon, M. Sanchez, and D. H. Johnson, “The use of platelet-rich plasma in arthroscopy and sports medicine: optimizing the healing environment,” Arthroscopy، المجلد. 26 ، لا. 2, pp. 269–278, 2010. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  7. A. Roffi, G. Filardo, E. Kon, and M. Marcacci, “Does PRP enhance bone integration with grafts, graft substitutes, or implants? A systematic review,” BMC Musculoskeletal Disorders، المجلد. 14, article 330, 2013. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  8. J. A. Textor, J. W. Norris, and F. Tablin, “Effects of preparation method, shear force, and exposure to collagen on release of growth factors from equine platelet-rich plasma,” المجلة الأمريكية للأبحاث البيطرية، المجلد. 72 ، لا. 2, pp. 271–278, 2011. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  9. F. Vannini, B. Di Matteo, G. Filardo, E. Kon, M. Marcacci, and S. Giannini, “Platelet-rich plasma for foot and ankle pathologies: a systematic review,” Foot and Ankle Surgery، المجلد. 20 ، لا. 1, pp. 2–9, 2014. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  10. Y. Zhu, M. Yuan, H. Y. Meng et al., “Basic science and clinical application of platelet-rich plasma for cartilage defects and osteoarthritis: a review,” هشاشة العظام والغضاريف، المجلد. 21 ، لا. 11, pp. 1627–1637, 2013. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  11. T. E. Foster, B. L. Puskas, B. R. Mandelbaum, M. B. Gerhardt, and S. A. Rodeo, “Platelet-rich plasma: from basic science to clinical applications,” المجلة الأمريكية للطب الرياضي، المجلد. 37 ، لا. 11, pp. 2259–2272, 2009. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  12. A. S. Wasterlain, H. J. Braun, and J. L. Dragoo, “Contents and formulations of platelet-rich plasma,” Operative Techniques in Orthopaedics، المجلد. 22 ، لا. 1, pp. 33–42, 2012. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  13. B. Di Matteo, G. Filardo, E. Kon, and M. Marcacci, “Platelet-rich plasma: evidence for the treatment of patellar and Achilles tendinopathy𠅊 systematic review,” Musculoskeletal Surgery، المجلد. 99 ، لا. 1, pp. 1–9, 2015. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  14. D. Fufa, B. Shealy, M. Jacobson, S. Kevy, and M. M. Murray, “Activation of platelet-rich plasma using soluble type I collagen,” Journal of Oral and Maxillofacial Surgery، المجلد. 66 ، لا. 4, pp. 684–690, 2008. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  15. S. Harrison, P. Vavken, S. Kevy, M. Jacobson, D. Zurakowski, and M. M. Murray, “Platelet activation by collagen provides sustained release of anabolic cytokines,” المجلة الأمريكية للطب الرياضي، المجلد. 39 ، لا. 4, pp. 729–734, 2011. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  16. E. Kon, G. Filardo, B. Di Matteo, and M. Marcacci, “PRP for the treatment of cartilage pathology,” The Open Orthopaedics Journal، المجلد. 7, pp. 120–128, 2013. View at: Google Scholar
  17. P. Torricelli, M. Fini, G. Filardo et al., “Regenerative medicine for the treatment of musculoskeletal overuse injuries in competition horses,” International Orthopaedics، المجلد. 35 ، لا. 10, pp. 1569–1576, 2011. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  18. G. Weibrich, T. Hansen, W. Kleis, R. Buch, and W. E. Hitzler, “Effect of platelet concentration in platelet-rich plasma on peri-implant bone regeneration,” عظم، المجلد. 34 ، لا. 4, pp. 665–671, 2004. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  19. B. Han, J. Woodell-May, M. Ponticiello, Z. Yang, and M. Nimni, “The effect of thrombin activation of platelet-rich plasma on demineralized bone matrix osteoinductivity,” The Journal of Bone & Joint Surgery𠅊merican Volume، المجلد. 91 ، لا. 6, pp. 1459–1470, 2009. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  20. B. lberts, D. Bray, J. Lewis et al., البيولوجيا الجزيئية للخلية, Garland Publishing, New York, NY, USA, 3rd edition, 1994.
  21. D. M. Ranly, J. McMillan, T. Keller et al., “Platelet-derived growth factor inhibits demineralized bone matrix-induced intramuscular cartilage and bone formation: a study of immunocompromised mice,” Journal of Bone and Joint Surgery A، المجلد. 87 ، لا. 9 I, pp. 2052–2064, 2005. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  22. L. Y. Carreon, S. D. Glassman, Y. Anekstein, and R. M. Puno, “Platelet gel (AGF) fails to increase fusion rates in instrumented posterolateral fusions,” العمود الفقري، المجلد. 30 ، لا. 9, pp. E243–E246, 2005. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  23. J. M. DeLong, R. P. Russell, and A. D. Mazzocca, “Platelet-rich plasma: the PAW classification system,” Arthroscopy، المجلد. 28 ، لا. 7, pp. 998–1009, 2012. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  24. S. C. Bir, J. Esaki, A. Marui et al., “Angiogenic properties of sustained release platelet-rich plasma: characterization in-vitro and in the ischemic hind limb of the mouse,” Journal of Vascular Surgery، المجلد. 50 ، لا. 4, pp. 870–879, 2009. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  25. E. Mariani, G. Filardo, V. Canella et al., “Platelet-rich plasma affects bacterial growth in vitro,” Cytotherapy، المجلد. 16 ، لا. 9, pp. 1294–1304, 2014. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  26. I. Martineau, E. Lacoste, and G. Gagnon, “Effects of calcium and thrombin on growth factor release from platelet concentrates: kinetics and regulation of endothelial cell proliferation,” Biomaterials، المجلد. 25 ، لا. 18, pp. 4489–4502, 2004. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  27. R. Landesberg, A. Burke, D. Pinsky et al., “Activation of platelet-rich plasma using thrombin receptor agonist peptide,” Journal of Oral and Maxillofacial Surgery، المجلد. 63 ، لا. 4, pp. 529–535, 2005. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  28. T. L. Ortel, M. C. Mercer, E. H. Thames, K. D. Moore, and J. H. Lawson, “Immunologic impact and clinical outcomes after surgical exposure to bovine thrombin,” Annals of Surgery، المجلد. 233 ، لا. 1, pp. 88–96, 2001. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  29. B. Hamilton, J. L. Tol, W. Knez, and H. Chalabi, “Exercise and the platelet activator calcium chloride both influence the growth factor content of platelet-rich plasma (PRP): overlooked biochemical factors that could influence PRP treatment,” British Journal of Sports Medicine، المجلد. 49 ، لا. 14, pp. 957–960, 2015. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  30. T. M. Bielecki, T. S. Gazdzik, J. Arendt, T. Szczepanski, W. Król, and T. Wielkoszynski, “Antibacterial effect of autologous platelet gel enriched with growth factors and other active substances: an in vitro study,” The Journal of Bone & Joint Surgery𠅋ritish Volume، المجلد. 89, no. 3, pp. 417–420, 2007. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  31. T. M. McCarrel, T. Minas, and L. A. Fortier, “Optimization of leukocyte concentration in platelet-rich plasma for the treatment of tendinopathy,” The Journal of Bone & Joint Surgery𠅊merican Volume، المجلد. 94 ، لا. 19, article e143, pp. 1–8, 2012. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  32. D. J. F. Moojen, P. A. M. Everts, R.-M. Schure et al., “Antimicrobial activity of platelet-leukocyte gel against المكورات العنقودية الذهبية,” Journal of Orthopaedic Research، المجلد. 26 ، لا. 3, pp. 404–410, 2008. View at: Publisher Site | منحة جوجل
  33. S. P. Arnoczky, D. Delos, and S. A. Rodeo, “What is platelet-rich plasma?” Operative Techniques in Sports Medicine، المجلد. 19 ، لا. 3, pp. 142–148, 2011. View at: Publisher Site | منحة جوجل

حقوق النشر

Copyright © 2016 Carola Cavallo et al. هذا مقال مفتوح الوصول يتم توزيعه بموجب ترخيص Creative Commons Attribution License ، والذي يسمح بالاستخدام غير المقيد والتوزيع والاستنساخ في أي وسيط ، بشرط الاستشهاد بالعمل الأصلي بشكل صحيح.


1. Avoid Transferring DC During Culture

Dendritic cells are composed of both adherent and non-adherent cells, making the movement of cells from one culture vessel to another a dicey situation. Those adherent cells won’t come off the plastic without a real fight. When possible, set up your cells in the culture configuration you want to use in your experiment, so you don’t have to disturb the cells.
If you do switch vessels during your culture or experimentation, expect to recover fewer cells.

2. Add the Right Proportion of Cytokines to Preserve the DC Phenotype

Dendritic cells will survive in culture for approximately one week. If you have plans to maintain your dendritic cells after an overnight culture, you need to add the proper proportion of granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and interleukin 4 (IL4) recombinant human proteins.

We recommend adding 500 U/mL of GM-CSF and 500 U/mL of IL4, which you can purchase from suppliers like Thermo Fisher or PeproTech. This will ensure your dendritic cells maintain their phenotype after thawing.

3. Activate Your DC, If Necessary

Our dendritic cells are immature, but you can easily activate or mature them by adding lipopolysaccharides (LPS), poly(I:C), or other pathogen pattern molecules. Alternatively, you could use cytokines, such as IFNγ or TNFα, in combination with prostaglandin to achieve a similar result.

Depending on the stimuli used, you can get a slightly different dendritic cell that could suppress an immune response rather than ramp it up.

4. Always Include Serum When Stimulating DC with LPS

You can stimulate your dendritic cells with LPS, but you must include serum as well for proper activation. The soluble CD14 in the serum facilitates binding of the LPS to the dendritic cells.

For serum, you can use human serum or fetal bovine serum to achieve the desired result.

5. Follow Our Detailed Protocol for Successful DC Cultures

In addition to these tips, be sure to follow the procedures outlined in our Human Dendritic Cell Culture protocol.
Have other research questions? Ask a scientist and get a quick answer!

Author: Anne Lodge, Ph.D.

Dr. Lodge is the Chief Science and Innovation Officer at Cellero. She has a strong background in cell-based therapeutics and immunology, including a Ph.D. in Cell and Molecular Biology from the University of Vermont and a postdoctoral fellowship with the Multiple Sclerosis Society studying the role of T cells in the disease process. Learn more about Dr. Lodge.

2 Comments

Hi, thank you for these tips. I want to ask something. As far a I know we couldn’t make cryopreserved storage of dendritic cells. Than how long can we culture these cells by changing the media?

If you are starting from monocytes, it takes 4-6 days before they fully differentiate into DC (when culturing with GM-CSF and IL-4). This is the best time to harvest the DCs for your experiment. You can add fresh media to maintain them in culture for 2-3 more days. However, these cells will be increasingly adherent to tissue culture plastic.

اترك رد إلغاء الرد

يستخدم هذا الموقع Akismet لتقليل البريد العشوائي. تعرف على كيفية معالجة بيانات تعليقك.


Platelets in atherothrombosis

The participation of platelets in atherogenesis and the subsequent formation of occlusive thrombi depend on platelets' adhesive properties and the inability to respond to stimuli with rapid activation. By understanding the multifaceted mechanisms involved in platelet interactions with vascular surfaces and aggregation, new approaches can be tailored to selectively inhibit the pathways most relevant to the pathological aspects of atherothrombosis.

Arterial thrombosis is the acute complication that develops on the chronic lesions of atherosclerosis and causes heart attack and stroke, today the most common causes of mortality in developed countries. Platelets, with fibrin, are prominent components of the thrombi (clots) that occlude arteries, but may also participate in the development and progression of the atherosclerotic plaque. Thus, platelets are central to the process of atherothrombosis, a term that describes the combination of acute and chronic events in arterial disease. The normal function of platelets, however, is to arrest bleeding from wounds, which requires adhesion to altered vascular surfaces and rapid cellular activation with the ensuing accumulation of additional platelets and fibrin into a growing thrombus. Progress in understanding the mechanisms of platelet adhesion, activation and aggregation may improve the ability to prevent thrombosis and, possibly, the progression of atherosclerosis.


شاهد الفيديو: سبب زيادة الصفائح الدموية (أغسطس 2022).