معلومة

14.3: مستقبلات 7-TM (بروتين G مقرون) - علم الأحياء

14.3: مستقبلات 7-TM (بروتين G مقرون) - علم الأحياء


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

لا عجب أن المستقبلات ذات الغشاء السبعة ، أو المستقبلات المقترنة ببروتين G هي عائلة من البروتينات التي تمر عبر غشاء الخلية 7 مرات. المحطة الأمينية خارج الخلية ومحطة الكربوكسيل داخل الخلايا. يوضح الشكل ( PageIndex {2} ) انتشار مناطق الغشاء من أجل الوضوح ، لكن مجالات الغشاء تتشكل معًا في شكل أسطواني.

تُستخدم بروتينات 7-TM كمستقبلات للناقلات العصبية مثل الإبينفرين (مستقبلات بيتا الأدرينالية) ، وأسيتيل كولين (مستقبلات المسكارين) ، والسيروتونين ، وكذلك الهرمونات مثل الجلوكاجون أو الهرمون المنبه للغدة الدرقية ، وحتى الروابط غير الجزيئية مثل الضوء ! Rhodopsins هي فئة من مستقبلات 7-TM التي يتم تنشيطها عندما تمتص الفوتون (الشكل ( PageIndex {5} )). يؤدي تنشيط هذه العائلة من المستقبلات ، سواء عن طريق الفوتون أو عن طريق الربط الترابطي الأكثر تقليدية ، إلى إحداث تغيير توافقي في المجال السيتوبلازمي الذي يغير التفاعل بين المستقبل ومركب البروتين المعروف باسم بروتين G غير المتجانسة.

يتكون بروتين G غير المتجانسة من وحدة فرعية a و b و g ، والتي يمكن لوحدة فرعية منها ربط GTP أو الناتج المحلي الإجمالي ، ويمكن أن تتحلل GTP بالناتج المحلي الإجمالي. عندما يكون مستقبل 7-TM غير نشط ، عادة ما يكون مركب البروتين G قريبًا من الغشاء عن طريق myristoylation أو palmitoylation للوحدة الفرعية و farnesylation أو geranylgeranylation للوحدة الفرعية g. بمجرد تنشيط المستقبل 7-TM ، فإنه يرتبط ببروتين G غير المتجانسة ، مما يتسبب في تخلي Ga عن الناتج المحلي الإجمالي والارتباط بـ GTP. يؤدي هذا بعد ذلك إلى فصل Ga عن الوحدتين الفرعيتين الأخريين. يمكنه بعد ذلك الارتباط مع إنزيم وتنشيطه لتوسيع سلسلة الإشارات. يبدأ أحد المسارين التقليديين بتنشيط Ga لمحلقة adenylate (adenylyl). Adenylate cyclase (AC) يحول ATP إلى cAMP. نظرًا لوفرة ATP و AC هو إنزيم سريع نسبيًا ، فإن التضخيم الأول للإشارة يأتي مع توليد جزيء "المرسل الثاني" cAMP. يمكن لكل جزيء cAMP بعد ذلك تنشيط إنزيمات أخرى ، أولها بروتين كيناز أ.يمكن أن يقوم PKA بعد ذلك بفسفرة مجموعة متنوعة من الركائز لتغيير النشاط الخلوي عن طريق التعبير الجيني أو المحركات الجزيئية أو التغيرات الأيضية.

المسار الكلاسيكي الآخر لمستقبلات 7-TM هو تنشيط phosphlipase Cb ، أيضًا بواسطة Ga. ينتج PLCb فعليًا جزيئين رسول ثانٍ: يتحلل الفوسفاتيدينوسيتول إلى دياسيل جلسرين (DAG) وإينوزيتول ثلاثي الفوسفات (IP).3). IP3 يؤدي في المقام الأول إلى إطلاق Ca2+ من الشبكة الإندوبلازمية. يمكن لـ DAG تنشيط بروتين كيناز C. كما يتم تنشيط PKC بواسطة Ca2+ وكلاهما Ca2+ ويمكن لـ DAG تنشيط PKC بشكل تآزري. بروتين كيناز سي هو كيناز مركزي مهم ثبت أنه يفسفر ويتحكم في نشاط العديد من الإنزيمات الأخرى من عناصر الهيكل الخلوي إلى عوامل النسخ.

يبدأ الاختلاف المثير للاهتمام من مسارات 7-TM الكلاسيكية بمستقبلات رودوبسين في الخلايا العصوية. تربط هذه المستقبلات الفوتونات من أجل التنشيط ، وتشرك بروتين G غير المتجانسة. ثم يرتبط Ga-GTP بالوحدة الفرعية g من phosphodiesterase (PDE) ، مما يؤدي إلى تنشيطها وتحفيز تحويل cGMP إلى GMP. مع انخفاض cGMP ، تغلق القنوات الأيونية ، وتستقطب الغشاء وتغير الإشارة من خلية القضيب إلى الدماغ (عبر توصيل الخلايا العصبية).

يجب أن يكون للرسل الثاني خاصيتان. يجب أن تكون صغيرة بما يكفي لتنتشر بشكل فعال ، ويجب أن تكون الخلية قادرة على توليدها بسرعة. كاليفورنيا2+ و cAMP تندرج في هذه الفئة. علاوة على ذلك ، يمكن إزالتهما من التداول بسرعة إلى حد ما: السابق بواسطة Ca2+ مضخات في ER و Golgi ، والأخيرة عن طريق نشاط phosphodiesterase. عندما تم اكتشاف مسار البروتين G ، كان استخدام رسل الدهون الثانية مفاجئًا. تم تجاهل الفسفوليبيدات الغشائية إلى حد كبير في ذلك الوقت كمكونات ثابتة بسيطة للأغشية. من الواضح الآن أن بعض الفسفوليبيدات نشطة كيميائيًا ، مع العديد من الإنزيمات التي تعدلها ، بما في ذلك الفوسفوليبازات ، وكينازات الفوسفوليبيد ، والفوسفاتازات الفوسفورية. تحتوي بعض هذه الإنزيمات على مجموعة متنوعة من الوظائف لأن ركيزة المنتج الخاصة بها قد تكون جزيء رسول مهم. على سبيل المثال ، PI3K (phosphatidylinositol-3-kinase) هو كيناز إشارة مركزي لأن منتجه ، PIP3 (فوسفاتيديلينوسيتول (3،4،5) - ثلاثي فوسفات) هو منشط لـ Akt / PKB وأنزيمات أخرى يمكنها تنشيط العديد من مسارات الإشارة.

يجب أن ينتهي التنشيط في النهاية ، ويفعل ذلك عندما يتحلل Ga في GTP المرتبط به. بهذه الطريقة ، يعمل Ga كنوع من المؤقت لتسلسل الإشارة. هذا مهم لأنه لكي تكون الإشارة فعالة ، يجب التحكم فيها بإحكام. في وقت مبكر جدًا من هذه الدورة ، تمت الإشارة إلى أن Ca2+ يتم الاحتفاظ به عند تركيز منخفض جدًا في سيتوبلازم الخلية لأننا نريد Ca2+- آليات حساسة لتكون قادرة على الاستجابة بسرعة لتدفق الكالسيوم ، لكننا نريد أيضًا أن نكون قادرين على إيقاف تشغيل الإشارة بسرعة حسب الحاجة ، ومن الواضح أن القيام بذلك أسهل بكثير عن طريق عزل كمية صغيرة من الكالسيوم2+ من الكثير منه. وبالمثل ، إذا دعت الحاجة إلى نشاط مستدام لخلية متلقية ، يتم تحقيقه عن طريق التنشيط المستمر للمستقبل وليس بتأثير طويل الأمد من تنشيط واحد. هذا يضمن أنه إذا كان يجب قطع التأثير الخلوي بشكل مفاجئ وسريع ، فيمكن تحقيقه دون فترة تأخير كبيرة بين توقف إفراز الهرمون ووقف الإشارات داخل الخلايا.

المستقبل هو جزء من آلية إغلاق أخرى أيضًا: لمنع التحفيز المفرط ، يتم إزالة حساسية المستقبلات لفترة قصيرة بعد تنشيطها. كيناز المستقبل المقترن بالبروتين G (GRK) يفسد مستقبلات 7-TM. تقوم الفسفرة بإنشاء مواقع التعرف على الإيقاف. تحتوي المحفزات على مجموعة متنوعة من الوظائف ، أبسطها هو العمل كمثبط تنافسي لربط بروتين G بالمستقبلات. هذا هو إزالة الحساسية قصيرة الأجل نسبيًا.

لإزالة التحسس لفترة أطول ، يرتبط الإعتقال بـ AP2 و clathrin ، مما يؤدي إلى تكوين النواة لحويصلة داخلية مغلفة بالكلاذرين. هذا يزيل المستقبل من سطح الخلية ، ويزيل حساسية الخلية لفترة زمنية أطول بكثير من المنافسة البسيطة بين بروتين الإعتقال وجي بروتين.

لدى الموقد وظيفة أخرى محتملة. يمكن أن تعمل كبروتينات سقالة تجلب مركب إشارة مختلف تمامًا لمستقبل 7-TM. يوضح الشكل ( PageIndex {8} ) مثالاً يتم فيه استخدام مستقبل 7-TM لتنشيط عامل نسخ Jun.

يجلب B-stopin AJK-1 و MKKY و JNK-1 لتنشيط JNK-1 ، والذي يمكنه بعد ذلك فوسفوريلات Jun. وهذا يسمح بنقل phospho-Jun إلى النواة و dimerization اللاحق ، وتحويله إلى عامل نسخ نشط.

ما هي بعض الإجراءات الخلوية التي يمكن أن يثيرها تنشيط مستقبلات 7-TM؟ كاليفورنيا2+ ديناميات سيتم تناولها في قسم منفصل. IP3 لقد ثبت أنه يثير تقلص العضلات الملساء والهيكلية ، وبلمرة الأكتين وتغيرات شكل الخلية ، وإطلاق الكالسيوم من المخازن داخل الخلايا ، وفتح قنوات البوتاسيوم ، وإزالة الاستقطاب الغشائي. وقد تورط cAMP في السيطرة على تكسر الجليكوجين وتكوين السكر ، والتمثيل الغذائي ثلاثي الجلسرين ، وإفراز هرمون الاستروجين بواسطة خلايا المبيض ، وإفراز الجلوكوكورتيكويد ، وزيادة نفاذية خلايا الكلى إلى الماء.


رؤى هيكلية للاختلافات بين مشتقات اللاكتيسول في الآليات المثبطة لمستقبلات الطعم الحلو البشري

يحتوي اللاكتيسول ، وهو مثبط لمستقبلات الذوق الحلو البشري ، على هيكل عظمي لحمض 2-phenoxypropionic وقد ثبت أنه يتفاعل مع مجال الغشاء للوحدة الفرعية T1R3 (T1R3-TMD) للمستقبل. تم التأكد من أن مثبطًا آخر ، وهو 2،4-DP ، والذي يشترك في نفس الهيكل الجزيئي مثل اللاكتيسول ، أقوى بنحو 10 أضعاف في نشاطه التثبيطي من اللاكتيسول ، ومع ذلك لا يزال يتعين توضيح الأساس الهيكلي لآلياتها المثبطة ضد المستقبل. تم الإبلاغ مؤخرًا عن الهياكل البلورية لـ TMD لمستقبلات الجلوتامات الأيضية ، والتي يتم تصنيفها إلى جانب T1R على أنها مستقبلات مقترنة بالبروتين C من الفئة C ، وجعلت من الممكن إنشاء نموذج هيكلي دقيق لـ T1R3-TMD. في هذه الدراسة ، تميزت الآلية الهيكلية التفصيلية الكامنة وراء تثبيط الطعم الحلو بمقارنة تأثير اللاكتيسول على T1R3-TMD مع تأثير 2،4-DP. أجرينا أولاً سلسلة من التجارب باستخدام الخلايا المستنبتة التي تعبر عن مستقبلات الطعم الحلو بالطفرات وفحصنا التفاعلات مع هذه المثبطات. بناءً على النتائج ، أجرينا بعد ذلك عمليات محاكاة لرسو السفن ثم طبقنا تقليل الطاقة المستند إلى الديناميكيات الجزيئية. كشفت تحليلاتنا بوضوح أن أيزومرات (S) لكل من اللاكتيسول و 2 ، 4-DP ، تفاعلت مع نفس البقايا السبعة في T1R3-TMD وأن الفاعلية المثبطة لتلك المثبطات ترجع أساسًا إلى استقرار التفاعلات بوساطة مجموعات الكربوكسيل الخاصة بهم. في البعد الرأسي للجيب الترابطي لـ T1R3-TMD. بالإضافة إلى ذلك ، تشارك 2،4-DP في تفاعل مسعور بوساطة مجموعة o-Cl ، وقد يكون هذا التفاعل مسؤولاً بشكل رئيسي عن الفعالية المثبطة العالية لـ 2،4-DP.

بيان تضارب المصالح

وقد أعلن الباحثون إلى أن لا المصالح المتنافسة موجودة.

الأرقام

الشكل 1. اللاكتيسول و 2،4-DP مثل الحلو ...

الشكل 1. اللاكتيسول و 2،4-DP كمثبطات للطعم الحلو.

(أ) الصيغ الهيكلية لـ (±) -لاكتيسول و ...

الشكل 2. محاكاة MD والمحاكاة المسبقة لها ...

الشكل 2. محاكاة MD والمحاكاة المسبقة لاكتيسول و 2،4-DP.

الشكل 3. مقارنة نتائج ...

الشكل 3. مقارنة نتائج عمليات تقليل MD لـ ( س ) -لاكتيسول و (...

الشكل 4. النشاط المثبط للطعم الحلو لـ ...

الشكل 4. النشاط المثبط للطعم الحلو لـ ( س )-, ( ص ) -لاكتيسول و (...


الملخص

تعد المستقبلات المقترنة بالبروتين G (GPCRs) أساسية للعديد من مسارات الإشارات الخلوية الأساسية. ينقلون الإشارات من الخارج إلى داخل الخلايا في عمليات فسيولوجية تتراوح من الرؤية إلى الاستجابة المناعية. من الصعب للغاية النظر إليها بشكل فردي باستخدام التقنيات التجريبية التقليدية. في الآونة الأخيرة ، ظهر نموذج جزيئي ذري زائف كأداة قيمة للوصول إلى المعلومات حول GPCRs ، وبشكل أكثر تحديدًا حول تفاعلاتهم مع بيئتهم في غشاء الخلية الأصلي والعواقب على تنظيمهم فوق الجزيئي. يستخدم هذا النهج نموذج الحبوب الخشنة Martini (CG) لوصف المستقبلات والدهون والمذيبات في محاكاة الديناميات الجزيئية (MD) وبتفاصيل كافية للسماح بالحفاظ على الخصوصية الكيميائية للجزيئات المختلفة. لقد فتح القضاء على درجات الحرية غير الضرورية عمليات محاكاة واسعة النطاق للتنظيم فوق الجزيئي بوساطة الدهون من GPCRs. هنا ، بعد إدخال طريقة Martini CGMD ، نراجع هذه الدراسات التي أجريت على أعضاء مختلفين من عائلة GPCR ، بما في ذلك رودوبسين (مستقبلات بصرية) ، ومستقبلات أفيونية ، ومستقبلات الأدرينالية ، ومستقبلات الأدينوزين ، ومستقبلات الدوبامين ، ومستقبلات السفينغوزين 1-فوسفات. سلطت هذه الدراسات الضوء على مجموعة مثيرة للاهتمام من مبادئ الفيزياء الحيوية الجديدة. تتراوح الأفكار من الكشف عن التشوهات الموضعية وغير المتجانسة للطبقة ثنائية الغشاء على سطح البروتين ، والتفاعلات المحددة لجزيئات الدهون مع GPCRs الفردية ، إلى تأثير مصفوفة الغشاء على التجميع الذاتي العالمي لـ GPCR. تنتهي المراجعة بنظرة عامة على الدروس المستفادة من استخدام طريقة CGMD ، والنتائج الفيزيائية الحيوية على تفاعل البروتين الدهني.


Lefkowitz ، R.J. عائلة المستقبلات السباعية. خلية الطبيعة بيول. 2، E133 – E136 (2000).منظور تاريخي يصف أصول مجال إشارات مستقبلات 7TM في السبعينيات والثمانينيات.

ديكسون ، آر إيه وآخرون. استنساخ الجين و (كدنا) لمستقبلات بيتا الأدرينالية في الثدييات والتماثل مع رودوبسين. طبيعة سجية 321, 75–79 (1986).تشير هذه الورقة إلى استنساخ مستقبلات β2 الأدرينالية ، وتشبيهها و 7 TM تماثل مع رودوبسين ، وتكهن بوجود عائلة كبيرة من هذه المستقبلات.

Dohlman ، H.G ، Thorner ، J. ، Caron ، M.G & amp Lefkowitz ، R.J. أنظمة نموذجية لدراسة مستقبلات الأجزاء السبعة عبر الغشاء. Annu. القس Biochem. 60, 653–688 (1991).

Lee، D.K، George، S.R & amp O'Dowd، B.F. جينات المستقبل المقترنة بالبروتين G الجديدة المعبر عنها في الدماغ: استمرار الاكتشاف لأهداف علاجية مهمة. رأي الخبراء. هناك. الأهداف 6, 1–18 (2002).

Palczewski ، K. et al. التركيب البلوري للرودوبسين: مستقبل مقترن بالبروتين G. علم 289, 739–745 (2000).يصف التركيب البلوري للمستقبل 7TM الوحيد الذي تم حله حتى الآن.

Rodbell، M.، Birnbaumer، L.، Pohl، S.L & amp Krans، H.M. نظام adenyl cyclase الحساس للجلوكاجون في أغشية البلازما في كبد الفئران. V. دور إلزامي للنيوكليوتيدات في عمل الجلوكاجون. J. بيول. تشيم. 246, 1877–1882 (1971).

بروتينات Gilman ، A.G.G: محولات الإشارات التي تولدها المستقبلات. Annu. القس Biochem. 56, 615–649 (1987).

باليستيروس ، ج. إيه وآخرون. تنشيط مستقبل β2 الأدرينالية ينطوي على تعطيل القفل الأيوني بين النهايات السيتوبلازمية للقطاعات الغشائية 3 و 6. J. بيول. تشيم. 276, 29171–29177 (2001).

Farahbakhsh، Z. T.، Ridge، K.D، Khorana، H.G & amp Hubbell، W.L. رسم خرائط التغيرات الهيكلية المعتمدة على الضوء في الحلقة السيتوبلازمية التي تربط الحلزونات C و D في رودوبسين: دراسة وضع العلامات الدورانية الموجهة للموقع. الكيمياء الحيوية 34, 8812–8819 (1995).

دي فريس ، ل. وآخرون. منظم عائلة إشارات البروتين G. Annu. القس فارماكول. توكسيكول. 40, 235–271 (2000).

Ross ، E.M & amp Wilkie ، T.M.GTPase- البروتينات المنشطة لبروتينات G غير المتجانسة: منظمات تأشير البروتين G (RGS) والبروتينات الشبيهة بـ RGS. Annu. القس Biochem. 69, 795–827 (2000).

Klein، S.، Reuveni، H. & amp Levitzki، A. تحويل الإشارة بواسطة بروتين G خميرة غير متجانسة غير قابل للانفصال. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 97, 3219–3123 (2000).

س. فيرغسون ، المفاهيم المتطورة في الالتقام الخلوي المقترن بالبروتين G: الدور في إزالة حساسية المستقبلات والتأشير. فارماكول. القس. 53, 1–24 (2001).

Pitcher ، J. A. ، Freedman ، N.J & amp Lefkowitz ، R.J.G. كينازات مستقبلات مقترنة بالبروتين. Annu. القس Biochem. 67, 653–692 (1998).مراجعة شاملة للكيمياء الحيوية وتنظيم كينازات مستقبلات البروتين G- المقترنة.

Daaka، Y.، Luttrell، L.M & amp Lefkowitz، R.J. تبديل اقتران مستقبلات β2 الأدرينالية ببروتينات G مختلفة بواسطة بروتين كيناز أ. طبيعة سجية 390, 88–91 (1997).يصف آلية جديدة يمكن من خلالها تنظيم خصوصية اقتران البروتين G لمستقبلات 7TM من خلال فسفرة مستقبلات البروتين كيناز أ.

Zamah، A. M.، Delahunty، M.، Luttrell، L.M & amp Lefkowitz، R.J. PKA-mediation phosphorylation of the β2-adrenergic receptor of the 2-adrenergic receptor of the Gs and Gi: Demonstration in a recitated system. J. بيول. تشيم. (في الصحافة).

Lawler، O. A.، Miggin، S. M. & amp Kinsella، B. T. Protein kinase A- mediation phosphorylation of serine 357 of the prostacyclin receptor for mouse- and to Gi- and to Gq-coupledactive phosphorylation of the serine 357 of the mouse prostacyclin receptor is بالتنسيق مع Gs- و Gi- و Gq-coupled. J. بيول. تشيم. 276, 33596–33607 (2001).

Krupnick ، ​​J.G & amp Benovic ، J.L. دور كينازات المستقبلات والموقوفات في تنظيم مستقبلات البروتين المقترن بـ G. Annu. القس فارماكول. توكسيكول. 38, 289–319 (1998).مراجعة شاملة لهذا النظام التنظيمي العالمي للمستقبلات.

تشانغ ، ج. وآخرون. الآليات الجزيئية لإشارات مستقبلات البروتين المقترنة ببروتين G: دور كينازات مستقبلات البروتين المقترنة بالبروتين G وموقفات في إزالة التحسس وإعادة التحسس بالمستقبلات. قنوات المستقبلات 5, 193–199 (1997).

Winstel ، R. وآخرون. تقاطع بروتين كيناز: استهداف غشاء كيناز مستقبلات بيتا الأدرينالية بواسطة بروتين كيناز سي. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 93, 2105–2109 (1996).

كونغ ، م وآخرون. تنظيم استهداف الغشاء لمستقبل كيناز 2 المقترن بالبروتين G بواسطة بروتين كيناز A وبروتين التثبيت AKAP79. J. بيول. تشيم. 276, 15192–15199 (2001).

Krueger ، K.M ، Daaka ، Y. ، Pitcher ، J.A & amp Lefkowitz ، R.J. دور الحبس في تحسس مستقبلات G البروتينية. تنظيم نزع الفسفرة من مستقبلات البيتا -2 الأدرينالية عن طريق التحميض الحويصلي. J. بيول. تشيم. 272, 5–8 (1997).

جرة ، ج. أ وآخرون. مستقبلات الفوسفاتيز المقترنة ببروتين G: بروتين فوسفاتيز من النوع 2A مع توزيع خلوي متميز وخصوصية ركيزة. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 92, 8343–8347 (1995).

Tsao، P. & amp von Zastrow، M. تقليل تنظيم المستقبلات المقترنة بالبروتين G. بالعملة. رأي. نيوروبيول. 10, 365–369 (2000).

Collins، S.، Caron، M.G & amp Lefkowitz، R.J. تنظيم استجابة مستقبلات الأدرينالية من خلال تعديل التعبير الجيني للمستقبل. Annu. القس فيسيول. 53, 497–508 (1991).

ليوبارسكي ، أ.ل وآخرون. مطلوب RGS9-1 من أجل التعطيل الطبيعي للنقل الضوئي لمخروط الماوس. مول. فيس. 7, 71–78 (2001).

أوليفيرا دوس سانتوس A. J. et al. تنظيم تنشيط الخلايا التائية والقلق والعدوان الذكوري بواسطة RGS2. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 97, 12272–12277 (2000).

هوارد ، إيه دي وآخرون. مستقبلات اليتيمة المقترنة بالبروتين G واكتشاف الترابط الطبيعي. اتجاهات فارماكول. علوم. 22, 132–140 (2001).

كوبيلكا ، ب.ك.وآخرون. جين عديم الترميز يشفر عضوًا محتملاً في عائلة المستقبلات المقترنة ببروتينات تنظيم نيوكليوتيدات الجوانين. طبيعة سجية 329, 75–79 (1987).

فارجين ، إيه وآخرون. يشفر الاستنساخ الجينومي G-21 الذي يشبه تسلسل مستقبلات بيتا الأدرينالية مستقبلات 5-HT1A. طبيعة سجية 335, 358–360 (1988).

هسو ، إس واي وآخرون. تفعيل المستقبلات اليتيمة بهرمون ريلاكسين. علم 295, 671–674 (2002).

ليمبو ، ب.م وآخرون. تنشط المنتجات الجينية Proenkephalin A عائلة جديدة من GPCRs الخاصة بالخلايا العصبية الحسية. طبيعة الأعصاب. 5, 201–209 (2002).

Chuang، D.M & amp Costa، ​​E. دليل على استيعاب موقع التعرف على مستقبلات بيتا الأدرينالية أثناء حساسية المستقبلات التي يسببها (-) - أيزوبروتيرينول. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 76, 3024–3028 (1979).

Chuang، D. M. & amp Costa، ​​E. β-Adrenergic receptors of the frog erythrocytes. عقابيل كيميائية حيوية بعد التحفيز باستخدام الأيزوبروتيرينول. نيوروتشيم. الدقة. 4, 777–793 (1979).

داكا ، واي وآخرون. الدور الأساسي لبطانة مستقبلات البروتين المقترنة بالبروتين G في تنشيط بروتين كيناز الميثوجين المنشط. J. بيول. تشيم. 273, 685–688 (1998).

Claing، A.، Laporte، S.A، Caron، M.G & amp Lefkowitz، R.J. Endocytosis of G protein-coupled receptors: أدوار كينازات مستقبلات البروتين المقترنة ببروتين G وبروتينات بيتا الإيقاف. بروغ. نيوروبيول. 66, 61–79 (2002).يستعرض الآليات المعقدة المشاركة في الالتقام الخلوي 7TM-receptor.

كلاينج ، إيه وآخرون. مسارات الالتقام المتعددة للمستقبلات المقترنة بالبروتين G المحددة بواسطة حساسية GIT1. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 97, 1119–1124 (2000).

سمارت ، إي جيه وآخرون. Caveolins والمجالات ذات الترتيب السائل ونقل الإشارة. مول. زنزانة. بيول. 19, 7289–7304 (1999).

Lohse ، M. J. وآخرون. بيتا-أريستين: بروتين ينظم وظيفة مستقبلات بيتا الأدرينالية. علم 248, 1547–1550 (1990).

Goodman، O. B.، Jr et al. β-Arrestin يعمل كمحول clathrin في الالتقام الخلوي لمستقبل β2-adrenergic. طبيعة سجية 383, 447–450 (1996).

لابورت ، إس إيه وآخرون. يقوم مجمع مستقبلات بيتا الأدرينالية / بيتا-أوقفين بتجنيد محول كلاثرين AP-2 أثناء الالتقام الخلوي. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 96, 3712–3717 (1999).

جيداروف ، آي وآخرون. تتطلب وظيفة Arrestin في الالتقام الخلوي للمستقبلات المقترنة بالبروتين G ربط phosphoinositide. EMBO J. 18, 871–881 (1999).

Scott، M.G، Benmerah، A.، Muntaner، O. & amp Marullo، S. تجنيد مستقبلات مقترنة ببروتين G المنشط إلى حفر موجودة مسبقًا مغلفة بالكلاذرين في الخلايا الحية. J. بيول. تشيم. 277, 3552–3559 (2002).

Santini ، F. ، Gaidarov ، I. & amp Keen ، J.H. J. خلية بيول. 156, 665–676 (2002).

أوكلي ، آر إتش وآخرون. تحدد التقاربات التفاضلية بين الإيقاف البصري وبيتا-أوقفين 1 وبيتا-أوقفين 2 لـ GPCRs فئتين رئيسيتين من المستقبلات. J. بيول. تشيم. 275, 17201–17210 (2000).

لوتريل ، لام وآخرون. تشكيل β-Arrestin المعتمد على مستقبلات β2 الأدرينالية- Src بروتين كينيز. علم 283, 655–661 (1999).

اهن ، س وآخرون. مطلوب فسفرة التيروزين بوساطة Src للدينامين من أجل استيعاب مستقبلات β2 الأدرينالية وإشارات كيناز البروتين المنشط بالميتوجين. J. بيول. تشيم. 274, 1185–1188 (1999).

اهن ، س وآخرون. ينظم الفسفرة التيروزينية المعتمدة على c-Src التجميع الذاتي للدينامين والالتقام الخلوي بوساطة المستقبلات. J. بيول. تشيم. 277, 26642–26651 (2002).

Shenoy، S. K.، McDonald، P. H.، Kohout، T.A & amp Lefkowitz، R.J. علم 294, 1307–1313 (2001).

بيكارت ، سي م. الآليات الكامنة وراء الانتشار. Annu. القس Biochem. 70, 503–533 (2001).

ماكدونالد ، بي إتش وآخرون. تحديد NSF كبروتين رابط β-stopin1. الآثار المترتبة على تنظيم مستقبل β2 الأدرينالية. J. بيول. تشيم. 274, 10677–10680 (1999).

كلاينج ، إيه وآخرون. تنشيط β-Arrestin بوساطة ADP-ribosylation 6 و β2-adrenergic receptor endocytosis. J. بيول. تشيم. 276, 42509–42513 (2001).

بريمونت ، آر تي وآخرون. تنظيم مستقبلات β2-الأدرينالية بواسطة GIT1 ، وهو بروتين منشط للبروتين GTPase المرتبط بمستقبلات الكيناز المرتبط بالبروتين G. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 95, 14082–14087 (1998).

كونغ ، م وآخرون. ملزم للمستقبلات الأدرينالية β2 بـ ن- عامل حساس لإيثيل الماليميد ينظم إعادة تدوير المستقبلات. J. بيول. تشيم. 276, 45145–45152 (2001).

Seachrist ، J.L et al. يعزز ارتباط Rab5 مع مستقبلات الأنجيوتنسين 2 من النوع 1A ارتباط Rab5 GTP والاندماج الحويصلي. J. بيول. تشيم. 277, 679–685 (2002).

كوهوت ، ت. إيه وآخرون. β-Arrestin 1 و 2 ينظمان بشكل تفاضلي إشارات المستقبلات الكبدية وتهريبها. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 98, 1601–1606 (2001).

Marchese ، A. & amp Benovic ، J.L. انتشار ناهض للمستقبل المقترن بالبروتين G CXCR4 يتوسط الفرز الليزوزومي. J. بيول. تشيم. 276, 45509–45512 (2001).

Dodge، K. & amp Scott، J. D. AKAP79 وتطور نموذج AKAP. FEBS ليت. 476, 58–61 (2000).

فريزر ، آي دي وآخرون. يسهل تجميع معقد مستقبلات الأدرينالية (2) - بروتين مرساة للكيناز - مستقبلات الفسفرة والتأشير. بالعملة. بيول. 10, 409–412 (2000).

شيه ، م وآخرون. المجمعات الديناميكية لمستقبلات بيتا الأدرينالية مع كينازات البروتين والفوسفاتيز ودور جرافين. J. بيول. تشيم. 274, 1588–1595 (1999).

Diviani ، D. ، Soderling ، J. & amp Scott ، J.D. AKAP-Lbc ، تقوم بتثبيت بروتين كيناز A ونوويات تكوين ألياف إجهاد انتقائية من نوع Gα12. J. بيول. تشيم. 276, 44247–44257 (2001).

تسونودا ، إس وآخرون. يقوم بروتين مجال PDZ متعدد التكافؤ بتجميع مجمعات الإشارات في سلسلة مقترنة ببروتين G. طبيعة سجية 388, 243–249 (1997).

براكمان ، بي آر وآخرون. هوميروس: بروتين يرتبط بشكل انتقائي بمستقبلات الغلوتامات الأيضية. طبيعة سجية 386, 284–288 (1997).

كاو ، دبليو وآخرون. الارتباط المباشر لـ c-Src المنشط بمستقبل β3 الأدرينالية مطلوب لتنشيط MAP kinase. J. بيول. تشيم. 275, 38131–38134 (2000).

ماريرو ، م ب وآخرون. التحفيز المباشر لمسار Jak / STAT بواسطة مستقبل الأنجيوتنسين II AT1. طبيعة سجية 375, 247–250 (1995).

هول ، آر وآخرون. يتفاعل مستقبلات β2 الأدرينالية مع العامل التنظيمي لمبادل الصوديوم / H + للتحكم في تبادل Na + / H +. طبيعة سجية 392, 626–630 (1998).

هول ، آر إيه وآخرون. يحدد الشكل الطرفي C الموجود في مستقبلات β2 الأدرينالية ومستقبل P2Y1 ومنظم التوصيل عبر الغشاء التليف الكيسي الارتباط بعامل تنظيم مبادل Na + / H + لبروتينات PDZ. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 95, 8496–8501 (1998).

Hu، L.A et al. ارتباط مستقبل β1 الأدرينالي مع PSD-95. تثبيط استيعاب المستقبلات وتسهيل تفاعل مستقبلات بيتا 1 الأدرينالية مع ن-ميثيل- d- مستقبلات الاسبارتات. J. بيول. تشيم. 275, 38659–38666 (2000).

Sheng و M. & amp Sala و C. PDZ وتنظيم المجمعات فوق الجزيئية. Annu. القس نيوروسسي. 24, 1–29 (2001).مراجعة موثوقة لآلية تفاعلات البروتين والبروتين التي تنظم العديد من تفاعلات GPCR.

لوتريل ، لام وآخرون. تشكيل β-Arrestin المعتمد على مستقبلات β2 الأدرينالية مستقبلات بروتين كيناز Src. علم 283, 655–661 (1999).

إمامورا ، ت. وآخرون. التوظيف بوساطة β-Arrestin لعائلة Src kinase نعم يتوسط نقل الجلوكوز المحفز endothelin-1. J. بيول. تشيم. 276, 43663–43667 (2001).

بارليك ، جيه وآخرون. تنظيم تنشيط التيروزين كيناز وإطلاق الحبيبات من خلال بيتا-أوقفين بواسطة CXCR1. طبيعة إمونول. 1, 227–233 (2000).

DeFea، K. A. et al. مطلوب الالتقام الخلوي المعتمد على β-Arrestin لمستقبل تنشيط البروتين 2 من أجل الاستهداف داخل الخلايا لـ ERK1 / 2 المنشط. J. خلية بيول. 148, 1267–1281 (2000).يصف دور β-stopin في التوسط في تنشيط ERK بواسطة مستقبلات 7TM.

لوتريل ، لام وآخرون. تفعيل واستهداف الكينازات التي تنظمها الإشارة خارج الخلية بواسطة سقالات بيتا توقف. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 98, 2449–2454 (2001).

ماكدونالد ، بي إتش وآخرون. β-Arrestin 2: سقالة MAPK منظمة المستقبلات لتنشيط JNK3. علم 290, 1574–1577 (2000).

توجو ، أ. وآخرون. سقالات β-Arrestin من سلسلة ERK تعزز نشاط ERK الخلوي ولكنها تمنع النسخ بوساطة ERK بعد تحفيز مستقبل الأنجيوتنسين AT1a. J. بيول. تشيم. 277, 9429–9436 (2002).

سيريون ، آر إيه وآخرون. إعادة تكوين نظام إنزيم أدينيلات حساس للهرمونات. يمنح مستقبل بيتا الأدرينالية النقية والبروتين التنظيمي لنيوكليوتيد الجوانين استجابة هرمونية للوحدة التحفيزية التي تم حلها. J. بيول. تشيم. 259, 9979–9982 (1984).

سيريون ، آر إيه وآخرون. مستقبلات β2 الأدرينالية في الثدييات: إعادة تكوين التفاعلات الوظيفية بين مستقبلات نقية وبروتين ربط نيوكليوتيد محفز نقي لنظام إنزيم الأدينيلات. الكيمياء الحيوية 23, 4519–4525 (1984).

Heldin، C. H. Dimerization من مستقبلات سطح الخلية في نقل الإشارة. زنزانة 80, 213–223 (1995).

Jordan، B. A. & amp Devi، L. A. G- البروتين المقترن تغاير مستقبلات ينظم وظيفة المستقبل. طبيعة سجية 399, 697–700 (1999).

ديفي ، ل.أ. اتجاهات فارماكول. علوم. 22, 532–537 (2001).

Salahpour ، A. ، Angers ، S. & amp Bouvier ، M. الأهمية الوظيفية لقلة قلة مستقبلات البروتين G. اتجاهات الغدد الصماء. متعب. 11, 163–168 (2000).

جالفيز ، ت. وآخرون. التفاعلات الخيفية بين الوحدات الفرعية GB1 و GB2 مطلوبة لوظيفة مستقبل GABAB المثلى. EMBO J. 20, 2152–2159 (2001).

نيلسون ، ج وآخرون. مستقبل طعم الأحماض الأمينية. طبيعة سجية 416, 199–202 (2002).

نيلسون ، جي وآخرون. مستقبلات الطعم الحلو في الثدييات. زنزانة 106, 381–390 (2001).

ماكلاتشي ، إل إم وآخرون. تنظم RAMPs النقل وخصوصية الترابط للمستقبلات الشبيهة بمستقبلات الكالسيتونين. طبيعة سجية 393, 333–339 (1998).

كواساكو ، ك وآخرون. تصور لمستقبلات الكالسيتونين الشبيهة بمستقبلات البروتينات المعدلة لنشاط المستقبل أثناء الاستيعاب وإعادة التدوير. J. بيول. تشيم. 275, 29602–29609 (2000).

Hilairet، S. et al. الاستيعاب الداخلي الذي يشجعه الناهض للمركب الثلاثي بين مستقبلات تشبه مستقبلات الكالسيتونين وبروتين تعديل نشاط المستقبل 1 (RAMP1) وبيتا-أوقفين. J. بيول. تشيم. 276, 42182–42190 (2001).

دين ، إم ك وآخرون. Dimerization من مستقبلات البروتين G- المقترنة. جيه ميد. تشيم. 44, 4595–4614 (2001).

جيلمان ، أ. يرجى التحقق من EGO عند الباب. مول. التدخلات 1, 14–21 (2001).

Brzostowski، J.A & amp Kimmel، A.R. التشوير عند صفر G: وظائف مستقلة عن بروتين G لمستقبلات 7-TM. اتجاهات Biochem. علوم. 26, 291–297 (2001).يستعرض إشارات G- البروتين المستقلة عن طريق مستقبلات 7 TM.

زينج ، ب. وآخرون. RGS-PX1 ، GAP لـ GαS وفرز nexin في التهريب الحويصلي. علم 294, 1939–1942 (2001).

ما ، واي سي وآخرون. Src tyrosine kinase هو مستجيب مباشر جديد لبروتينات G. زنزانة 102, 635–646 (2000).

McLaughlin، S. K.، McKinnon، P. J. & amp Margolskee، R. F.Gustducin هو بروتين G خاص بخلايا التذوق يرتبط ارتباطًا وثيقًا بالمحولات. طبيعة سجية 357, 563–569 (1992).

Kwok-Keung Fung، B. & amp Stryer، L. يحفز رودوبسين المتحلل ضوئيًا تبادل GTP للناتج المحلي الإجمالي المرتبط في الأجزاء الخارجية لقضيب الشبكية. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 77, 2500–2504 (1980).

Meng، J.، Glick، J.L، Polakis، P. & amp Casey، P. J. يقترح التفاعل الوظيفي بين Gαz و Rap1GAP شكلاً جديدًا من الحديث الخلوي المتبادل. J. بيول. تشيم. 274, 36663–36669 (1999).

كاتادا ، ت. وآخرون. المكون التنظيمي المثبط للنيوكليوتيدات المرتبط بالنيوكليوتيدات في محلقة الأدينيلات. خصائص ووظيفة البروتين المنقى. J. بيول. تشيم. 259, 3568–3577 (1984).

بوكوتش ، جي إم وآخرون. تنقية وخصائص المكون التنظيمي المثبط للنيوكليوتيدات المرتبط بالنيوكليوتيدات في محلقة الأدينيلات. J. بيول. تشيم. 259, 3560–3567 (1984).

تشيكومي ، هـ وآخرون. التنشيط الفعال لـ RhoA بواسطة مستقبلات Gαq و Gq المقترنة. J. بيول. تشيم. 277, 27130–27134 (2002).

Booden، M.A، Siderovski، D.P & amp Der، C. J. مول. زنزانة. بيول. 22, 4053–4061 (2002).

Smrcka ، A. V. ، Hepler ، J. R. ، Brown ، K. O. & amp Sternweis ، P. C. تنظيم نشاط فسفوليباز C الخاص بـ polyphosphoinositide بواسطة Gq المنقى. علم 251, 804–807 (1991).

Meigs ، T. E. ، Fields ، T. A. ، McKee ، D. D. & amp Casey ، P. J. Interaction of Gα12 and Gα13 with the cytoplasmic domain of cadherin يوفر آلية لإطلاق β-catenin. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 98, 519–524 (2001).

كوزاسا ، ت. وآخرون. p115 RhoGEF ، بروتين تنشيط GTPase لـ Gα12 و Gα13. علم 280, 2109–2111 (1998).

Boyer ، J.L ، Waldo ، G.L & amp Harden ، T.K. βγ -تفعيل الوحدة الفرعية لفوسفوليباز C. J. بيول. تشيم. 267, 25451–25456 (1992).

المخيمات ، م وآخرون. التحفيز الانتقائي لـ Isozyme لـ phospholipase C-β2 بواسطة الوحدات الفرعية للبروتين G. طبيعة سجية 360, 684–686 (1992).

جرة ، ج. أ وآخرون. دور الوحدات الفرعية βγ لبروتينات G في استهداف مستقبلات بيتا الأدرينالية كيناز إلى المستقبلات المرتبطة بالغشاء. علم 257, 1264–1267 (1992).

Tang، W. J. & amp Gilman، A. G. التنظيم الخاص بالنوع من إنزيم أدينيليل بواسطة الوحدات الفرعية للبروتين G. علم 254, 1500–1503 (1991).

ستيفنس ، ل. وآخرون. يتم تنشيط نشاط كيناز فوسفوينوسيتيد 3 الجديد في الخلايا المشتقة من النخاع العظمي بواسطة الوحدات الفرعية للبروتين G. زنزانة 77, 83–93 (1994).

Logothetis ، D.E et al. تنشط الوحدات الفرعية βγ للبروتينات المرتبطة بـ GTP القناة المسكارينية K + في القلب. طبيعة سجية 325, 321–326 (1987).العرض الأول في نظام الثدييات للفكرة الراديكالية آنذاك بأن ثنائيات البروتين G يمكن أن تنشط المؤثرات بشكل مباشر.

تشين ، سي ك وآخرون. الاستجابات الضوئية غير الطبيعية وموت الخلايا المبرمج الناجم عن الضوء في قضبان تفتقر إلى رودوبسين كيناز. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 96, 3718–3722 (1999).

جابر ، م وآخرون. الدور الأساسي لـ β-adrenergic receptor kinase 1 في نمو القلب ووظيفته. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 93, 12974–12979 (1996).

Rockman ، H. A. et al. يمنع التعبير عن مثبط مستقبلات بيتا-الأدرينالية كيناز 1 تطور فشل عضلة القلب في الفئران المستهدفة بالجينات. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 95, 7000–7005 (1998).

بيبل ، ك وآخرون. يؤدي اختلال الجين كيناز 3 (GRK3) المرتبط بالبروتين G إلى فقدان حساسية مستقبلات الرائحة. J. بيول. تشيم. 272, 25425–25428 (1997).

ووكر ، ج.ك.وآخرون. تغير مجرى الهواء والاستجابات القلبية في الفئران التي تفتقر إلى كيناز مستقبلات مقترنة ببروتين G 3. أكون. J. Physiol. 276، R1214 – R1221 (1999).

Gainetdinov ، R. R. et al. فرط الحساسية المسكارينية وإضعاف حساسية المستقبلات في الفئران التي تعاني من نقص البروتين في مستقبلات كيناز 5. عصبون 24, 1029–1036 (1999).

فونغ ، إيه إم وآخرون. الانجذاب الكيميائي المعيب للخلايا الليمفاوية في الفئران التي تعاني من نقص-stopin2 و GRK6. بروك. ناتل أكاد. علوم. الولايات المتحدة الأمريكية 99, 7478–7483 (2002).

كونر ، دي إيه وآخرون. الفئران β-Arrestin1 بالضربة القاضية تبدو طبيعية ولكنها تظهر استجابات قلبية متغيرة لتحفيز بيتا الأدرينالية. سيرك. الدقة. 81, 1021–1026 (1997).

Bohn ، L.M et al. تسكين المورفين المحسن في الفئران التي تفتقر إلى بيتا-أوقف 2. علم 286, 2495–2498 (1999).

Bohn ، L.M et al. إن إزالة حساسية مستقبلات الأفيون من قبل بيتا-ستيتشن -2 تحدد تحمل المورفين ولكن ليس الاعتماد. طبيعة سجية 408, 720–723 (2000).

Dohlman ، H.G & amp Thorner ، J.W. تنظيم نقل الإشارة الذي بدأه بروتين G في الخميرة: النماذج والمبادئ. Annu. القس Biochem. 70, 703–754 (2001).


العائلة المستهدفة لمستقبلات البروتين المقترنة 7 TM G

ستظهر هذه المراجعة لاحقًا كفصل في الكتاب البيولوجيا الكيميائية - من الجزيئات الصغيرة إلى أنظمة بيولوجيا وتصميم الأدوية (محرران: S. Schreiber، T. Kapoor، G. Wess)، Wiley-VCH، Weinheim، المقرر للنشر في نوفمبر 2006.

الملخص

مناهج البيولوجيا الكيميائية لها تاريخ طويل في استكشاف عائلة مستقبلات البروتين المقترن G (GPCR) ، والتي تمثل أكبر وأهم مجموعة من الأهداف للعلاجات. كشف تحليل الجينوم البشري عن عدد كبير من الأعضاء الجدد بوظيفة فسيولوجية غير معروفة والتي أصبحت اليوم محور العديد من برامج اكتشاف العقاقير الصيدلانية العكسية. نظرًا لأن شرائح الغشاء الكارهة للماء السبعة هي سمة هيكلية مشتركة لهذه المستقبلات ، ولأن الإشارات من خلال بروتينات G غير المتجانسة لا تظهر في جميع الحالات ، يُشار إلى هذه البروتينات أيضًا باسم سبعة غشاء (7 TM) أو مستقبلات سربنتين. تلخص هذه المراجعة المعالم التاريخية الهامة لأبحاث GPCR ، من البداية ، عندما كان علم الأدوية وصفيًا بشكل أساسي ، إلى عصر البيولوجيا الجزيئية الحديثة ، مع استنساخ المستقبل الأول ، والآن توفر ذخيرة GPCR البشرية بأكملها في التسلسل والبروتين. مستوى. يوضح كيف كان اكتشاف الأدوية الموجه من GPCR يعتمد في البداية على الاختبار الدقيق لعدد قليل من المركبات الكيميائية المصنّعة خصيصًا ويتم متابعته اليوم من خلال مناهج اكتشاف الأدوية الحديثة ، بما في ذلك تصميم المكتبة التجميعية ، والبيولوجيا الهيكلية ، والمعلوماتية الجزيئية ، وتقنيات الفحص المتقدمة لـ تحديد المركبات الجديدة التي تنشط أو تمنع GPCRs على وجه التحديد. تسمح لنا هذه المركبات ، جنبًا إلى جنب مع التقنيات الجديدة الأخرى ، بدراسة دور المستقبلات في علم وظائف الأعضاء والطب ، ونأمل أن تؤدي إلى علاجات جديدة. نحدد أيضًا كيفية تقدم البحث الأساسي حول آليات الإشارات والتنظيم لـ GPCRs ، مما يؤدي إلى اكتشاف بروتينات جديدة تتفاعل مع GPCR وبالتالي فتح آفاق جديدة لتطوير الأدوية. توضح الأمثلة العملية من دراسات تعبير GPCR ، و HTS (الفرز عالي الإنتاجية) ، وتصميم المكتبات التوليفية التي تركز على أحادي الأمين GPCR أبحاث البيولوجيا الكيميائية المستمرة لـ GPCR. أخيرًا ، نحدد التقدم المستقبلي الذي قد يربط اكتشافات اليوم بتطوير أدوية جديدة.


مستقبلات البروتين المقترنة بالحشرة G ونقل الإشارة

المستقبلات المقترنة بالبروتين G (GPCRs) عبارة عن بروتينات غشائية بسبعة (7-TM) تقوم بتحويل الإشارات خارج الخلية إلى استجابات فسيولوجية خلوية من خلال تنشيط بروتينات ربط نيوكليوتيدات الجوانين غير المتجانسة (الوحدات الفرعية αβγ). تم الحفاظ على خصائصها العامة بشكل جيد بشكل ملحوظ خلال التطور. Despite this general resemblance, a large variety of different signals are mediated via this category of receptors. Several GPCR-(sub)families have an ancient origin that is situated before the divergence of Protostomian and Deuterostomian animals. Nevertheless, an enormous diversification has occurred since then. The availability of novel sequence information is growing very rapidly as a result of molecular cloning experiments and of metazoan genome (أنواع معينة انيقة, ذبابة الفاكهة سوداء البطن, الانسان العاقل) and EST (expressed sequence tags) sequencing projects. The Drosophila Genome Sequencing Project will certainly have an important impact on insect signal transduction and receptor research. In parallel, convenient expression systems and functional assay procedures will be needed to investigate insect receptor properties and to monitor the effects of natural and artificial ligands. The study of the evolutionary aspects of G protein–coupled receptors and of their signaling pathways will probably reveal insect-specific features. More insight into these features may result in novel methods and practical applications. قوس. الكيمياء الحيوية الحشرات. فيسيول. 48:1–12, 2001. © 2001 Wiley-Liss, Inc.


الملخص

Prostaglandins play a critical physiological role in both cardiovascular and immune systems, acting through their interactions with 9 prostanoid G protein-coupled receptors (GPCRs). These receptors are important therapeutic targets for a variety of diseases including arthritis, allergies, type 2 diabetes, and cancer. The DP prostaglandin receptor is of interest because it has unique structural and physiological properties. Most notably, DP does not have the 3–6 ionic lock common to Class A GPCRs. However, the lack of X-ray structures for any of the 9 prostaglandin GPCRs hampers the application of structure-based drug design methods to develop more selective and active medications to specific receptors. We predict here 3D structures for the DP prostaglandin GPCR, based on the GEnSeMBLE complete sampling with hierarchical scoring (CS-HS) methodology. This involves evaluating the energy of 13 trillion packings to finally select the best 20 that are stable enough to be relevant for binding to antagonists, agonists, and modulators. To validate the predicted structures, we predict the binding site for the Merck cyclopentanoindole (CPI) selective antagonist docked to DP. We find that the CPI binds vertically in the 1–2–7 binding pocket, interacting favorably with residues R310 7.40 and K76 2.54 with additional interactions with S313 7.43 , S316 7.46 , S19 1.35 , etc. This binding site differs significantly from that of antagonists to known Class A GPCRs where the ligand binds in the 3–4–5–6 region. We find that the predicted binding site leads to reasonable agreement with experimental Structure–Activity Relationship (SAR). We suggest additional mutation experiments including K76 2.54 , E129 3.49 , L123 3.43 , M270 6.40 , F274 6.44 to further validate the structure, function, and activation mechanism of receptors in the prostaglandin family. Our structures and binding sites are largely consistent and improve upon the predictions by Li et al. ( جيه. تشيم. شركة 2007 , 129 (35), 10720) that used our earlier MembStruk prediction methodology.


Death Receptor Signaling Pathway

Death receptors are cell surface receptors that transmit apoptotic signals initiated by specific ligands and play a central role in instructive apoptosis. Death receptors belong to the tumor necrosis factor receptor (TNFR) gene superfamily. Eight members of the death receptor family have been characterized so far: TNFR1 (also known as DR1, CD120a, p55 and p60), CD95 (also known as DR2, APO-1 and Fas), DR3 (also known as APO-3, LARD, TRAMP and WSL1), TRAILR1 (also known as DR4 and APO-2), TRAILR2 (also known as DR5, KILLER and TRICK2), DR6, ectodysplasin A receptor (EDAR) and nerve growth factor receptor (NGFR). These death receptors are distinguished by a cytoplasmic region of

80 residues termed the death domain (DD). When these receptors are triggered by corresponding ligands, a number of molecules are recruited to the death domain and subsequently a signaling cascade is activated. Two types of death receptor signaling complex can be distinguished. The first group comprises the death-inducing signaling complexes (DISCs) that result in the activation of caspase-8, which plays the central role in transduction of the apoptotic signal. DISC is formed at the CD95 receptor, TRAILR1 or TRAILR2. The second group comprises the TNFR1, DR3, DR6 and EDAR. These recruit a different set of molecules, which transduce both apoptotic and survival signals.


The Molecular Basis of G Protein𠄼oupled Receptor Activation

G protein–coupled receptors (GPCRs) mediate the majority of cellular responses to external stimuli. Upon activation by a ligand, the receptor binds to a partner heterotrimeric G protein and promotes exchange of GTP for GDP, leading to dissociation of the G protein into α and βγ subunits that mediate downstream signals. GPCRs can also activate distinct signaling pathways through arrestins. Active states of GPCRs form by small rearrangements of the ligand-binding, or orthosteric, site that are amplified into larger conformational changes. Molecular understanding of the allosteric coupling between ligand binding and G protein or arrestin interaction is emerging from structures of several GPCRs crystallized in inactive and active states, spectroscopic data, and computer simulations. The coupling is loose, rather than concerted, and agonist binding does not fully stabilize the receptor in an active conformation. Distinct intermediates whose populations are shifted by ligands of different efficacies underlie the complex pharmacology of GPCRs.


النتائج

Β1AR Disrupts Kv11.1/14-3-3ε Association

Figure 1A shows that Kv11.1 coimmunoprecipitated with cotransfected 14-3-3ε, a result that is consistent with the report of Kagan وآخرون. (2002). Interestingly, coexpression of β1ARwt disrupts the interaction, both in basal and Iso stimulated conditions. A detailed electrophysiological analysis of Kv11.1 currents upon Iso β1AR stimulation was performed in CHO cells stably expressing Kv11.1 channels cotransfected or not with the cDNA encoding β1ARwt. Figure 1, B and E, shows families of current traces for control conditions and after 10-min exposure to 1 nM Iso, obtained by applying 5-s pulses, imposed in 20-mV increments between −80 and +60 mV. The holding potential was fixed at −80 mV, and tail currents were recorded upon repolarization to −60 mV. In nontransfected cells (which express low levels of endogenous βAR, unpublished data), Iso accelerated the time course of activation but did not modify the maximum outward current and the time course of deactivation (n = 6 Figure 1B, Table 1). In cells expressing β1ARwt, Iso decreased both the outward and the tail current and accelerated the time course of the initial phase of deactivation, without modifying the time course of activation (n = 6 Figure 1E, Table 1). Panels C, F and D, G show the current-voltage plots of steady-state current at the end of the depolarizing step and the activation curves obtained in the presence and the absence of Iso in nontransfected (C and D) and in β1ARwt-transfected (F and G) cells. In nontransfected cells, Iso did not significantly modify either the steady state current or the slope of the activation curve (Figure 1, C and D), whereas it slightly shifted the midpoint of the activation curve to more negative potentials (Table 1). Such minor Iso-induced changes in channel activity in the absence of transfected β1AR appear to be not receptor-mediated, because it was also observed in the presence of 1 μM propranolol (unpublished data). In cells expressing β1ARwt Iso significantly decreased the current amplitude at −20 and −10 mV (Figure 1F) and the tail current amplitude after pulses between −20 and +60 mV (Figure 1G), without modifying the voltage dependence of activation (n = 6, p > 0.05 Table 1).

Figure 1. β1AR disrupts Kv11.1/14-3-3ε association and Iso inhibits Kv11.1 currents. (A) HEK-293 cells were cotransfected with Kv11.1 and HA-14-3-3ε in the absence or presence of β1ARwt. After stimulation or not with Iso (10 μM) for 5 min, the presence of Kv11.1 in HA-14-3-3 immunoprecipitates was assessed by using specific channel antibodies. The expression levels of the different proteins in cell lysates were analyzed by immunoblot analysis as detailed in المواد والأساليب. Results are representative of three independent experiments. (B and E) Kv11.1 current traces obtained by applying 5-s pulses that were imposed in 20-mV increments between −80 mV and +60 mV. Deactivating Kv11.1 tail currents were recorded at −60 mV. Currents were obtained in the absence and the presence of 1 nM Iso in cells transfected (E) or not (B) with β1ARwt. (C and F) Mean Kv11.1 current-voltage relationship 5-s isochronal in the absence and presence of 1 nM Iso in the indicated experimental conditions. (D and G) Mean Kv11.1 activation curves in the absence and presence of 1 nM Iso in the indicated conditions. Each point represents the mean of ≥6 experiments and *p < 0.05 versus control.

Table 1. Effects of 1 nM Iso on the time course of activation, fast phase of deactivation, and voltage dependence of activation of Kv11.1 currents recorded in CHO cells

τ, time constant of current activation at 0 mV τF, time constant of the fast phase of tail current deactivation, recorded after pulses to +60 mV Vh, midpoint of the activation curve k, slope of the activation curve.

a p < 0.05 vs. data obtained in control conditions.

Β1AR Directly Interacts with 14-3-3ε

A possible explanation for the inhibition of Kv11.1/14-3-3ε interaction in the presence of β1AR may be a direct competition between Kv11.1 and β1AR for 14-3-3ε proteins. In this regard, in the third cytoplasmic loop and the C-terminal region of the β1AR there are PKA phosphorylation sites (Rapacciuolo وآخرون., 2003 RRPسRLV and RPRAسGCL, respectively) that exhibit certain homology with the consensus binding site of 14-3-3 proteins (Muslin وآخرون., 1996 Yaffe وآخرون.، 1997). Therefore, we explored whether 14-3-3ε proteins bind to β1AR. To this end, HEK-293 cells were transiently transfected with tagged β1AR and 14-3-3ε constructs. Figure 2A shows that upon immunoprecipitation of β1AR, HA-tagged 14-3-3ε could be detected in the receptor complexes and that the presence of Iso promoted a marked increase in β1AR/14-3-3ε coimmunoprecipitation at 5 min of stimulation. These results suggest that activation of β1AR promotes conformational changes and/or triggers signaling pathways that facilitate the recruitment of 14-3-3 proteins to the receptor complex. The basal association of β1AR and 14-3-3ε in cotransfected cells is decreased upon incubation with the β-antagonist betaxolol (unpublished data), consistent with the idea that the reported basal β1AR activity associated with receptor overexpression (Engelhardt وآخرون., 2001) also triggers to certain extent the mechanisms underlying the association. To more clearly visualize the modulation of β1AR/14-3-3 binding by different agents, cells were pretreated with betaxolol to lower such basal recruitment.

Figure 2. β1AR stimulation increases β1AR/14-3-3ε association in HEK-293 cells and guinea pig heart. (A) HEK-293 cells transiently transfected with Flag β1AR and HA-14-3-3ε and pretreated with betaxolol for 1 h were challenged with Iso, and the association between β1AR and 14-3-3 proteins was investigated by immunoprecipitation and Western blot analysis as detailed in المواد والأساليب. Data indicate the amount of coprecipitated 14-3-3ε proteins, normalized by receptor immunoprecipitation and referred to association in basal (i.e., nonstimulated) conditions, and are mean ± SEM of four independent experiments. Representative gels are shown left. (B) Endogenous β1AR/14-3-3ε complexes are present in guinea pig heart extracts. After incubation of dissociated heart tissue with Iso 10 μM for the indicated periods of time, β1AR were partially purified from solubilized heart membrane extracts by affinity chromatography using alprenolol-Sepharose columns. After elution, fractions were assayed for the presence of receptor and 14-3-3ε proteins by Western blot using specific antibodies as detailed in المواد والأساليب. In the case of the β1AR, two bands are apparent in some fractions likely due to different glycosylation patterns. Gels are representative of two independent experiments.

To validate this association in a more physiological setting, we searched for the occurrence of these molecular complexes in endogenous conditions. After exposure of guinea pig heart samples to Iso for different periods of time, β1AR were partially purified by affinity chromatography using the antagonist alprenolol. On elution of bound receptors and their associated proteins, fractions were analyzed for the presence of β1AR and 14-3-3ε proteins by using specific antibodies. Figure 2B indicates that 14-3-3ε proteins coeluted with purified endogenous receptors and that such coelution is increased upon agonist stimulation. This result confirms that β1AR and 14-3-3ε proteins associate ”in situ“ in the heart in an agonist-dependent way.

Consistent with the idea that stimulation of the cAMP/PKA pathway is involved in triggering β1AR/14-3-3ε binding, their coimmunoprecipitation is rapidly promoted by incubating cells with forskolin, a well-known AC activator (Figure 3A). Conversely, both basal and agonist-induced association is blocked in the presence of the PKA inhibitor H-89 (Figure 3B), but not by protein kinase C or mitogen-activated protein kinase/ERK kinase (MEK) inhibitors (Ro-31-8220 and PD98059, respectively). Overall, these data clearly establish that PKA activity is directly or indirectly required for triggering the presence of β1AR and 14-3-3ε proteins in the same molecular complex.

Figure 3. The association between β1AR and 14-3-3 proteins is direct and dependent on PKA activity. HEK-293 cells transiently transfected with Flag β1AR and HA-14-3-3ε were stimulated with forskolin (A) or Iso in the absence or presence of the indicated protein kinase inhibitors (B). The receptors were then immunoprecipitated and the presence of 14-3-3ε proteins analyzed and quantitated as in Figure 1. Gels representative of three independent experiments are shown. The fold-stimulation of β1AR/14-3-3ε association in each experimental setting with respect to wild-type receptor in basal conditions, normalized by the amount of β1AR present in the immunoprecipitates, is shown in Supplementary Figure 3, A and B. (C) Phosphorylation of β1AR cytoplasmic domain by PKA. The indicated GST fusion protein, encompassing the third intracellular loop of the β1AR, or GST as a control was incubated with PKA as detailed in Material and Methods, resolved by electrophoresis and analyzed by Coomassie blue staining or autoradiography ( 32 P). (D) The β1AR GST fusion protein (or GST as a control) was incubated in the absence or presence of PKA as in C. After washing, the GST proteins were incubated for 3 h in the presence of purified GST 14-3-3ε, and association to the latter protein was analyzed by immunoprecipitation with specific 14-3-3ε antibodies or a nonrelated IgG as a control. The immunoprecipitates were resolved by electrophoresis and blotted with 14-3-3ε or anti-GST antibodies to detect β1AR fusion protein, migration of which (including a GST-3il-β1AR proteolytic fragment) is shown with asterisks. Results are representative of two independent experiments.

To test if PKA phosphorylated β1AR would directly recruit 14-3-3 proteins, we next performed in vitro assays with purified 14-3-3ε and a β1AR cytoplasmic domain fusion protein. As shown in Figure 3C, a GST-fusion protein encompassing the third intracellular loop of the β1AR (GST-3il-β1AR) was readily phosphorylated in the presence of purified PKA. The GST-β1AR construct were subsequently incubated with purified GST-14-3-3ε, followed by immunoprecipitation with specific 14-3-3ε antibodies (or control nonrelated antibodies). Figure 3D shows a robust, specific interaction of 14-3-3ε with GST-3il-β1AR in a PKA phosphorylation–dependent way.

Mutation of PKA Phosphorylation Sites Renders β1AR Unable To Associate to 14-3-3ε and To Compete Its Interaction with Kv11.1

Overall, these results demonstrated a direct interaction between 14-3-3ε and PKA-phosphorylated β1AR. To further explore this point, we generated different β1AR mutants (β1ARS312A, β1ARS412A, and the double mutant β1ARS312,412A) in which serine residues 312 and 412 were substituted for alanines, a modification reported to prevent their phosphorylation by PKA upon receptor stimulation (Rapacciuolo وآخرون.، 2003). All these receptor constructs showed a similar pattern of adenylyl cyclase stimulation upon expression of comparable levels in HEK-293 cells and challenge with Iso (see Supplementary Figure S1). Despite such efficient activation of the cAMP signaling pathway, the ability of these mutants to associate to cotransfected 14-3-3ε isoforms, both in basal and agonist-stimulated conditions is completely lost in the double mutant β1ARS312,412A (Figure 4A) or markedly decreased for the individual mutants (Figure 4B), in comparison with β1ARwt. These results clearly indicate that PKA phosphorylation of the β1AR at these residues is required for the association of 14-3-3 proteins. In contrast, mutation of S312 to aspartate, which would mimic receptor phosphorylation, leads to an increased β1AR/14-3-3ε interaction even in basal conditions (Figure 4C).

Figure 4. Mutation of residues critical for PKA-mediated phosphorylation render β1AR unable to associate to 14-3-3ε proteins. HEK-293 cells were transiently transfected with HA-tagged 14-3-3ε and different Flag-tagged β1AR constructs. Cells were stimulated with Iso (10 μM) for the time indicated, and the association between the different receptors and 14-3-3ε proteins assessed as in previous figures. Gels are representative of 3–4 independent experiments. The fold-stimulation of β1AR/14-3-3ε association in each experimental setting with respect to the wild-type receptor in basal conditions, normalized by the amount of β1AR present in the immunoprecipitates, is shown in Supplementary Figure 3, C–E.

Β1ARwt and Mutants Unable To Interact with 14-3-3ε Display a Different Pattern of Modulation of Kv11.1

Our data suggested that β1AR stimulation would sequentially lead to PKA activation, receptor phosphorylation, and recruitment of 14-3-3ε proteins to the complex, which would displace these molecules from their binding sites in Kv11.1 channels. To explore this hypothesis, we tested whether the presence of β1AR mutants, differing in their ability to recruit 14-3-3ε, had different effects on the interaction between Kv11.1 and 14-3-3ε.

In contrast to the disruption of binding observed with β1ARwt, the Kv11.1/14-3-3ε association is preserved upon expression of similar levels of β1ARS312,412A (Figure 5A). In this case the presence of Iso leads to an enhanced association, in agreement with the expected increase in PKA-phosphorylated Kv11.1. Consistently, the β1ARS312A mutant, which barely displays association with 14-3-3, is also unable to disrupt the Kv11.1/14-3-3 binding, whereas β1AR S312D markedly inhibits Kv11.1/14-3-3 coimmunoprecipitation, as the β1ARwt does (Figure 5A, right panel).

Figure 5. Modulation of Kv11.1/14-3-3ε interaction and Kv11.1 currents by expression of different β1AR mutants. (A) HEK-293 cells were cotransfected with Kv11.1 and HA-14-3-3ε in the absence or presence of the indicated β1AR constructs. After stimulation or not with Iso (10 μM) for 5 min, the presence of Kv11.1 in HA-14-3-3 immunoprecipitates was assessed as in Figure 1A. The expression levels of the different proteins in cell lysates were analyzed by immunoblot analysis as detailed in المواد والأساليب. Results are representative of three independent experiments. (B and E) Kv11.1 current traces were obtained and analyzed as detailed in Figure 1 in the absence and the presence of 1 nM Iso in cells transfected with β1ARS312,412A or β1ARS312D as indicated. (C and F) Mean Kv11.1 current–voltage relationship 5 s isochronal in the absence and presence of 1 nM Iso in cells transfected with the indicated receptor constructs. (D and G) Mean Kv11.1 activation curves in the absence and presence of 1 nM Iso in cells transfected with the indicated receptor constructs. Each point represents the mean of ≥6 experiments and *p < 0.05 versus control.

Interestingly, in cells expressing β1ARS312,412A (Figure 5B) Iso increased the maximum outward current and accelerated the time course of activation but did not modify the time course of deactivation (Table 1). In contrast to the results obtained with β1ARwt (see Figure 1, E–G), Iso significantly increased the maximum outward current amplitude at negative potentials (Figure 5C) and markedly shifted the voltage-dependence of activation (Figure 5D), which may explain the increase in the tail and maximum outward currents observed at negative potentials (n = 6–9 p < 0.05 vs. control Table 1). It should be stressed that in cells expressing β1ARS312A or β1AR S412A the effects produced by Iso on current amplitude, as well as on the time- and voltage-dependent properties of the channels, were almost identical to those produced in cell expressing β1ARS312,S412A (Table 1). On the contrary, in cells expressing the β1ARS312D mutant (Figure 5, E–G), Iso accelerated the time course of the initial phase of deactivation (Table 1) and decreased the maximum outward current at potentials between −20 and +20 mV and the tail current elicited by applying pulses positive to −30 mV, without modifying the voltage-dependence of the activation (Figure 5G and Table 1), a situation reminiscent of the effects observed in cells expressing β1ARwt (Figure 1, E–G).

To better compare the effects induced by Iso, in Figures 6, I–K the percentages of change in the maximum outward current that elicited at −20 mV and in the amplitude of tail currents elicited after pulses to +60 mV or to −20 mV are shown. In cells expressing β1ARWt or β1ARS312D, Iso decreased the current amplitude at −20 mV by 19.9 ± 5.4% (n = 6) and by 23.5 ± 1.8% (n = 7), respectively (panel I), whereas in cells not transfected with β1AR, Iso increased the current by 13.9 ± 3.2% (n = 6). In cells expressing β1ARS312A, β1ARS412A, or β1ARS312,412A, Iso markedly increased the current amplitude (n = 6–9, p < 0.05 vs. increase in nontransfected cells panel I). In cells expressing β1ARwt or β1ARS312D, Iso inhibited the tail current after pulses to + 60 mV (panel J) by 30.1 ± 5.3 and 32.1 ± 12.3%, respectively. In contrast, the reduction of the tail currents induced by Iso in nontransfected cells and in cells expressing β1ARS312A, β1ARS412A, or β1ARS312,412A was significantly lower (p < 0.01, n = 6–9 panel J). Moreover, in these mutants again in contrast to the ≈20% inhibition observed in cells expressing β1ARwt or S312D, Iso significantly increased the tail current amplitude after pulses to −20 mV (n = 6–9 Figure 6K).

Figure 6. The differential effect of Iso on Kv11.1 currents mediated by β1ARwt or β1AR S312,412A is abolished in the presence of 14-3-3 inhibitors. (A, C, E, and G) Mean Kv11.1 current–voltage relationship 5 s isochronal in the absence and presence of 1 nM Iso for cells transfected with β1AR wt or β1ARS312,412A in the presence of R18 (A and C) or in cells cotransfected with DN14-3-3 mutant (E and G). (B, D, F, and H) Mean Kv11.1 activation curves in the absence and presence of 1 nM Iso for cells transfected with β1ARwt or β1ARS312,412A in the presence of R18 (B and D) or in cells cotransfected with DN14-3-3 mutant (F and H). (I–K) Percentage of change induced by 1 nM Iso in the different conditions in the amplitude of Kv11.1 currents elicited after 5-s pulses to −20 mV (I) and tail currents elicited on repolarization to −60 mV after 5-s pulses to +60 mV (J) and −20 mV (K). In I *p < 0.05 versus Kv11.1. In J, *p <0.05 versus data obtained in β1ARwt transfected cells, # p < 0.05 versus data obtained in β1ARS312,S412A-transfected cells. Each point or bar represents the mean ± SEM of ≥6 experiments.

To confirm that 14-3-3 proteins are involved in these differential effects of the β1AR phosphorylation deficient mutants on Kv11.1 current modulation, we next performed similar experiments in conditions where endogenous 14-3-3 function was inhibited. We first studied the effects of Iso in the presence of R-18 (200 nM), an unphosphorylated peptide that binds to all 14-3-3 isoforms with equal affinities producing a competitive inhibition (Wang وآخرون.، 1999). Because it can be presumed that the membrane diffusion of R-18 would be limited, this inhibitor was added to the internal solution that dialyzed the cells when the patch seals were broken. Kv11.1 currents recorded in R-18 dialyzed cells were of similar amplitude to those recorded in not dialyzed cells (p > 0.05) and exhibited the same time- and voltage-dependent properties. Interestingly, under these conditions, the differential effects produced by Iso on Kv11.1 currents in β1ARwt- and β1ARS312,412A-transfected cells were not observed. Iso similarly inhibited the maximum outward current elicited in cells expressing either β1ARwt or β1ARS312,S412A (Figure 6, A and C), as well as the tail currents elicited on return to −60 mV (Figure 6, B and D). Furthermore, Iso did not modify either the time course of channel activation and deactivation, or the voltage-dependence of activation (Table 2). Similar results were obtained when a different strategy of inhibition of 14-3-3 function based on cotransfection with a DN14-3-3 mutant was used (Figure 6, E–H, and Table 2). The effects of Iso on Kv11.1 channels in cells expressing β1AR wt or β1ARS312,S412A in the presence of 14-3-3 inhibitors, were qualitatively identical and not quantitatively different to those produced in cells expressing β1ARwt in the absence of inhibitors.

Table 2. Effects of 1 nM Iso on the time course of activation, fast phase of deactivation, and voltage-dependence of activation of Kv11.1 currents recorded in CHO cells

τ, time constant of current activation at 0 mV τF, time constant of the fast phase of tail current deactivation, recorded after pulses to +60 mV Vh, midpoint of the activation curve k, slope of the activation curve.


شاهد الفيديو: البروتين G يفعل قناة أيونية (يونيو 2022).


تعليقات:

  1. Druas

    السلعة الخلفية ، هل هناك بجودة أفضل؟

  2. Quigley

    قرأت الكثير عن هذا الموضوع اليوم.

  3. Elvy

    Propertyman يذهب

  4. Mozes

    يمكن مناقشتها بلا حدود ..

  5. Attis

    مبروك ماهي الكلمات التي تحتاجها ... فكرة رائعة

  6. Branden

    كل إجازة شخصية اليوم؟

  7. Dunos

    هذا هو الخطأ.

  8. Ngozi

    أقدم لكم القدوم إلى موقع الويب حيث توجد العديد من المقالات حول هذا الأمر.



اكتب رسالة